結果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質和RNA。應用Tim4的外泌體強結合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導書中對該技術進行詳細說明，這項技術的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復性確認帶來困難。近年，隨著國際細胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦，提案MISEV指南作為國際標準，計劃或已經(jīng)開始進行EV研究的科學家請務必閱讀這些方針。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。湖南胸水外泌體提取
外泌體的組成較為復雜，其內(nèi)含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質和脂質。這些分子被外泌體攜帶進入血液循環(huán)，而后被靶細胞吸收，從而調(diào)節(jié)靶細胞基因表達和細胞功能。此外，外泌體相關的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達，參與細胞分化、細胞凋亡及細胞信號的傳導。有研究表明，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強種瘤細胞的侵襲和轉移能力、介導種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進而促進種瘤的發(fā)發(fā)展。湖南胸水外泌體提取尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體細胞結合的途徑。
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題, Wako 研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture? Exosome Isolation Kit PS）提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細胞通過翻轉酶作用導向細胞膜內(nèi)側，暴露在外泌體膜外側3）。另外，T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4（Tim4 通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結合4）?；谏鲜鲋R，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學醫(yī)學系免疫學華山教授共同開發(fā)，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。
幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式細胞術。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經(jīng)涉及種瘤醫(yī)治領域、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術，允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒，客戶一次性能夠分析多達9個不同的樣本，很大節(jié)省了時間和經(jīng)濟成本。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)兼容各種生物樣本，除了純化的外泌體之外，對于血液、尿液、腹水中的外泌體也可直接檢測分析，很大拓展了研究范圍。全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設備。該設備能夠提供全部的外泌體表征信息，包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作簡單，結果可靠。一經(jīng)推出，便引起了外泌體領域科研工作者的普遍關注，短短兩年時間在全球已有50多個實驗室采用該技術，發(fā)表重要文獻近百篇。外泌體并作為癥狀早期診斷技術，應用于與癥狀進展相關的研究。海洋生物外泌體
隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。湖南胸水外泌體提取
外泌體（Exosome）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質雙分子層結構；存在于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；外泌體攜帶有多種蛋白質、脂類、RNA等重要信息，不只在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。湖南胸水外泌體提取