遼寧血清外泌體鑒定

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-24

在種瘤微環(huán)境中,種瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,壓制機(jī)體的抗種瘤免疫反應(yīng);肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并開(kāi)啟TLR8,使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化,從而導(dǎo)致種瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中,細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報(bào)道稱(chēng),NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,開(kāi)啟的T細(xì)胞可以通過(guò)調(diào)控Fas信號(hào)通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病醫(yī)治的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)種瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報(bào)道稱(chēng),外泌體miR-302b可以通過(guò)壓制TGFβRⅡ來(lái)壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)細(xì)胞中。遼寧血清外泌體鑒定

由于這些胞外囊泡(EV)與生理和病理狀況之間的關(guān)系,人們對(duì)EV的興趣呈指數(shù)增長(zhǎng)。 EVs對(duì)新型診斷和臨床轉(zhuǎn)化有很大希望。近的研究已經(jīng)將這些交流所需的一些任務(wù)歸結(jié)為細(xì)胞外囊泡(如外泌體和微泡),主要參與髓鞘膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元之間的相互信號(hào)傳遞從而促進(jìn)神經(jīng)元存活、由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認(rèn)為是神經(jīng)變性疾病和腦病擴(kuò)散的重要因素。這些細(xì)胞外囊泡功能為以前無(wú)法識(shí)別的神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)跨細(xì)胞相互作用增加了新方式。遼寧血漿外泌體透射電鏡檢測(cè)以前無(wú)法用超速離心法提取的微囊泡,也通過(guò)運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。

外泌體的組成較為復(fù)雜,其內(nèi)含有多種生物大分子,如:核酸(雙鏈DNA和各種RNA亞型)、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán),而后被靶細(xì)胞吸收,從而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞基因表達(dá)和細(xì)胞功能。此外,外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子,調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達(dá),參與細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)。有研究表明,外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強(qiáng)種瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、介導(dǎo)種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)發(fā)展。

目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法,但這些方法混有非常多的雜質(zhì),必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定,不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機(jī)、無(wú)法進(jìn)行多樣品分析等問(wèn)題。因此外泌體研究相對(duì)困難,需要盡快開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此,日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過(guò)磷酯酰絲氨酸(PS)法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠,再經(jīng)過(guò)含有EDTA的洗脫緩沖液進(jìn)行分離,提取高純度的完整外泌體。外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱(chēng)為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類(lèi)型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式,作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。然而,我們對(duì)于EV形成的分子機(jī)制知識(shí)的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專(zhuān)注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì),總結(jié)了其生物學(xué)效應(yīng),特別是免疫系統(tǒng),討論了分泌囊泡可能作為細(xì)胞間信使的潛在作用。各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。遼寧血漿外泌體透射電鏡檢測(cè)

從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。遼寧血清外泌體鑒定

從細(xì)胞培養(yǎng)物中富集的總外泌體(使用“總外泌體分離”試劑或超速離心)可以通過(guò)免疫磁珠捕獲進(jìn)一步純化特定的亞群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特異性試劑,或?qū)㈡溍褂H和素試劑與您選擇的生物素化抗體結(jié)合,以基于表面抗原,純化所有群體。外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn), 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。遼寧血清外泌體鑒定