當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、種瘤侵襲等方方面面。有研究表明種瘤來源的外泌體參與到種瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了種瘤的生長(zhǎng)與侵襲。結(jié)果表明，PS親和法可以檢測(cè)到許多目前為止都無法檢測(cè)的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。安徽血漿外泌體示蹤
已經(jīng)有許多關(guān)于外泌體作用的報(bào)導(dǎo)，根據(jù)這些現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)中，從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認(rèn)外泌體生理作用的單獨(dú)方法就是明確外泌體的釋放機(jī)制，通過促進(jìn)或壓制釋放機(jī)制，分析會(huì)引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。甚至活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。實(shí)際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體，其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較， PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測(cè)可高出10~100倍以上，幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白，回收量高，操作重復(fù)性好。細(xì)胞外泌體circRNA測(cè)序從癥狀患者樹突狀細(xì)胞釋放的外泌體中，含有各種癥狀細(xì)胞來源的蛋白質(zhì)。
結(jié)果表明，PS親和法可以檢測(cè)到許多目前為止都無法檢測(cè)的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測(cè)、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對(duì)該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明，這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評(píng)價(jià)，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即：對(duì)各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年，隨著國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)的成立、世界性研究者研討會(huì)的舉辦，提案MISEV指南作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請(qǐng)務(wù)必閱讀這些方針。
近年來眾多文獻(xiàn)報(bào)道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進(jìn)一步的Western blotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)種瘤的發(fā)發(fā)展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。血液中的成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體，可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的移動(dòng)和增殖以及血管新生來促進(jìn)傷口愈合。
外泌體中這些物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與它們?cè)诜置诩?xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)不同，所以可能存在一種外泌體特異蛋白和mRNA/miRNA在外泌體內(nèi)選擇性積累的機(jī)制。這種特異性可將外泌體內(nèi)的RNA作為生物標(biāo)記，更進(jìn)一步作為醫(yī)治開發(fā)方法的靶點(diǎn)。外泌體中的mRNA一旦被靶細(xì)胞吞噬，能夠引起這個(gè)細(xì)胞內(nèi)的功能性蛋白的表達(dá)，但外泌體中多數(shù)的miRNA是前體而非功能性miRNA，這些miRNA起著何種生理性意義，學(xué)者們正在研究。由于外泌體含有各種蛋白質(zhì)、RNA和脂質(zhì)，研究人員正將其進(jìn)行細(xì)胞分類，建立數(shù)據(jù)庫(kù)（ExoCarta）。此外，在世界各地分別進(jìn)行著運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)的大規(guī)模分析工作，而FunRich的EV plugin作為一種通用的分析手段已被公布出來。今后，在推進(jìn)外泌體研究方面，各領(lǐng)域的研究人員信息共享至關(guān)重要。外泌體研究相對(duì)困難，需要盡快開發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。遼寧血清外泌體示蹤
建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫(kù)也可作為規(guī)避混亂的方法之一。安徽血漿外泌體示蹤
幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體，同時(shí)外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前對(duì)于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及種瘤醫(yī)治領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。安徽血漿外泌體示蹤