外泌體載yao方法已在多種研究中得到應(yīng)用，但各自有一定的局限性：共孵育依賴藥物跨膜運輸而包載；超聲法和電穿孔法較為常用，但都破壞了外泌體的膜結(jié)構(gòu)而使藥物進入外泌體，與參數(shù)有較大關(guān)系；擠壓法依賴儀器的機械力，但機械力是否對外泌體產(chǎn)生影響未知；反復(fù)凍融法載藥能力較差；對外泌體修飾可以達到提高細胞攝取或者靶向而改善藥物的療效；藥物混合物中加入皂苷會有體內(nèi)溶血的潛在風(fēng)險。目前研究者應(yīng)用較多的方法是共孵育結(jié)合超聲、超聲、電穿孔、修飾外泌體。樹突細胞分泌的外泌體表面會表達出CD9，有利于加強外泌體與靶細胞的融合，提高外泌體對藥物運輸?shù)男?。江蘇組織樣本外泌體載藥參考價格
外泌體的脂質(zhì)雙分子膜可以保護其在血液循環(huán)中不被降解,但是這種膜結(jié)構(gòu)以及其內(nèi)含各種豐富的物質(zhì),使得外泌體載藥變得困難。外泌體只有保證膜結(jié)構(gòu)的完整性,才能不引起免疫反應(yīng),不被MPS吞噬。目前,將藥物載入外泌體的方法主要有兩種:(1)前轉(zhuǎn)載,在分離外泌體之前,將藥物與母代細胞共培養(yǎng)和對母代細胞進行轉(zhuǎn)染,可以讓母代細胞分泌含有藥物的外泌體; 主要是用轉(zhuǎn)染劑將“貨物”轉(zhuǎn)染進入親代細胞(或者將“貨物與親代細胞孵育”),然后收集培養(yǎng)基,獲得載有“貨物”的外泌體的過程。該方法的主要問題是合適有效的轉(zhuǎn)染試劑很少,且轉(zhuǎn)染試劑無法完全去除,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低,無法排除轉(zhuǎn)染試劑對實驗的影響。(2)后轉(zhuǎn)載,分離出外泌體之后,將藥物載入外泌體。江蘇組織樣本外泌體載藥參考價格在小鼠模型中利用外泌體裝載姜黃素和過氧化氫酶可證明其在神經(jīng)保護方面的作用。
外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關(guān)注的焦點。將連接G11靶向肽的外泌體（G11-EXOs）用于遞送中流抑制性miRNA到高表達EGFR的乳腺ai組織中。研究人員將DiR標(biāo)記的G11-EXOs和未經(jīng)修飾的外泌體尾靜脈注射入荷瘤小鼠體內(nèi)24h后，通過huo體成像觀察G11-EXOs組在中流部位的熒光強度是未連接靶向肽外泌體組熒光強度的3倍，說明G11-EXOs在體內(nèi)句有良好的靶向效果。隨后，研究人員將let-7amiRNA包載到G11－EXOs中并靜脈注射到小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)它能準(zhǔn)確定位到中流組織，明顯抑制中流的生長。
天然來源的外泌體含有眾多內(nèi)源性脂質(zhì)、蛋白及核酸類物質(zhì),其自身具有一定的成藥潛力,例如間充質(zhì)干細胞來源的外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域獲得了巨大成功。當(dāng)外泌體用作遞送載體時,一般還需人為裝載藥物。理想的載yao方法不僅要實現(xiàn)較高的載藥效率,還應(yīng)保留外泌體和藥物的功能和完整性。目前,在不破壞外泌體膜完整性的情況下將藥物有效載入到外泌體中仍是一個巨大挑戰(zhàn)。現(xiàn)有的載yao方法可分為分泌前載藥法和分泌后載藥法。分泌前載藥法通常將親代細胞與藥物共孵育(一般需要加轉(zhuǎn)染試劑),使藥物進入細胞質(zhì),細胞質(zhì)中的藥物通過主動或被動的方式被分選到外泌體中,然后通過合適的提取方法即可獲得載藥的外泌體。分泌后載yao方法是目前常用的外泌體載藥策略,通常需要先分離提純外泌體,再將藥物載入其中。藥物載入到外泌體中的方式可分為兩種，即外源性載yao方式和內(nèi)源性載yao方式。
外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關(guān)注的焦點。外泌體載帶藥物常用的電穿孔方法，通過將外泌體、藥物和電穿孔緩沖液共孵育，然后在一定條件下行電脈沖處理，后用微型擠出機擠出而實現(xiàn)外泌體載藥。該方法成功將大分子卟啉裝載入乳腺ai細胞分泌的外泌體中；有研究表明外泌體成功載帶RNA藥物miR一26a可用于肝aizhiliao。該方法是否可實現(xiàn)外泌體載帶蛋白質(zhì)類藥物有待進一步研究。該方法可能存在破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、影響蛋白質(zhì)的活性和蛋白質(zhì)裝載率低等缺點，從而限制其應(yīng)用。包載厚樸酚的外泌體比游離厚樸酚有更高的zhiliao功效，可改善細胞攝取從而提高抗中流功效。江蘇組織樣本外泌體載藥參考價格
裝載紫杉醇的外泌體可有效抑制胰腺ai細胞的增殖。江蘇組織樣本外泌體載藥參考價格
外泌體載帶蛋白質(zhì)藥物的方法包括直接和間接兩種載yao方式。間接載yao方式是目前實現(xiàn)外泌體載帶目標(biāo)蛋白質(zhì)的主要方法，通過基因工程使目標(biāo)蛋白質(zhì)核酸轉(zhuǎn)染供體細胞，待供體細胞表達目標(biāo)蛋白質(zhì)后，分離純化其培養(yǎng)基，得到載帶有目標(biāo)蛋白質(zhì)的外泌體遞送系統(tǒng)。主要缺點是載藥周期長、載藥量和載藥過程不可控，在一定程度上限制該方法在構(gòu)建外泌體遞送系統(tǒng)上的應(yīng)用；直接載yao方式是指不涉及外泌體供體細胞，直接通過某種化學(xué)或物理作用將外源性蛋白質(zhì)載入外泌體中的方法。因周期短、操作簡單、過程可控等優(yōu)點，成為一種極句前景的研究方法。江蘇組織樣本外泌體載藥參考價格
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