研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子,同時也表達(dá)胎盤特異性蛋白分子,證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見,動態(tài)光散射分析粒徑,結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后,與細(xì)胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性,進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體,并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對其進(jìn)行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。干細(xì)胞外泌體可以有效活化提高細(xì)胞能量加速細(xì)胞排毒、淡化色斑。江蘇動物組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測
利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,不過目前抗ai癥藥物的運(yùn)載存在著種種挑戰(zhàn),主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn):(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu,體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運(yùn)輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長其循環(huán)時間。近期,兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中,并對其抗中流作用進(jìn)行了研究。江蘇海洋動物組織外泌體透射電鏡檢測外泌體在心臟修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。
在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對PTX運(yùn)輸,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。
年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是失明的主要原因。視力喪失是由視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)和光感受器萎縮和/或視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管生成引起的。近日,JEV雜志上的一篇報(bào)道使用具有補(bǔ)體因子HY402H高風(fēng)險多態(tài)性的AMD患者特異性RPE細(xì)胞對外泌體、它們的載體和在疾病病理學(xué)中的作用進(jìn)行綜合分析。研究表明AMD RPE的特點(diǎn)是增強(qiáng)的極化外泌體分泌。多組學(xué)分析表明,AMD RPE EV攜帶RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì),它們介導(dǎo)關(guān)鍵的AMD特征,包括氧化應(yīng)激、細(xì)胞骨架功能障礙、血管生成和玻璃膜疣積聚。miR-155可分泌至外泌體中介導(dǎo)鄰近胰腺ai細(xì)胞的吉西他濱耐藥,是潛在的胰腺ai化療療效預(yù)測因子。
缺氧已被證明會誘導(dǎo)細(xì)胞外囊泡(EV)的釋放,并對EV的組成和功能產(chǎn)生影響。缺氧EV可增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的存活和血管生成能力,在免疫細(xì)胞中具有kang炎作用,并通過改變浸潤性單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的免疫代謝特征來促進(jìn)tumour進(jìn)展和侵襲。miR-21-5p是EV中醉常報(bào)道的缺氧誘導(dǎo)的microRNA(miRNA)。載有miR-21-5p的EV與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成,并已被證明可以增加ai細(xì)胞的遷移、擴(kuò)張和侵襲。在幾項(xiàng)研究中,缺氧顯示以缺氧誘導(dǎo)因子-α(HIFα)依賴性方式增加EV中miR-21-5p的水平,并且這些EV與受體的kang炎和抗細(xì)胞凋亡作用相關(guān)細(xì)胞。EVs調(diào)節(jié)受體細(xì)胞功能的能力使EVs成為診治性診治的有吸引力的候選者,并且從生物流體中檢測背景特定EV貨物改變的可能性支持它們作為生物標(biāo)志物的潛力。 腫瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放外泌體。安徽植物葉組織外泌體wb檢測
尿液外泌體甲狀腺球蛋白是預(yù)測甲狀腺ai復(fù)發(fā)的潛在標(biāo)志物。江蘇動物組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測
目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒,是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設(shè)備要求低,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分復(fù)雜,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)PLAP這一特性,使用耦合到磁珠的抗PLAP抗體,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,不適用于大規(guī)模提取制備,且免疫磁珠價格昂貴,不利于提取技術(shù)的普及。江蘇動物組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測
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