選用來源于生物的天然藥物載體細(xì)胞外泌體作為DATS的遞送載體,具有多種優(yōu)勢:首先,外泌體可以來源于患者自身的細(xì)胞,在藥物傳遞過程中減少了免疫原性;其次,外泌體作為一種膜結(jié)構(gòu)載體,與脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)類似,能夠通過其表面的膜蛋白與靶細(xì)胞膜融合, 將其負(fù)載的藥物直接運送到受體細(xì)胞中,避免了細(xì)胞吞噬-溶酶體途徑帶來的藥物降解及細(xì)胞毒性等問題;此外,不同來源的外泌體因其供體細(xì)胞的差異性而呈現(xiàn)出不同的特性。在使用外泌體裝載DATS來研究抗中流轉(zhuǎn)移作用中選用外泌體的供體細(xì)胞為肺轉(zhuǎn)移中流細(xì)胞B16BL6,研究表明,中流細(xì)胞外泌體的產(chǎn)生和釋放比正常細(xì)胞明顯升高,并帶有宿主細(xì)胞獨特的性質(zhì)。外泌體可以包載疏水性的姜黃素，提高其溶解度、穩(wěn)定性和體內(nèi)生物利用度。天津動物血液樣本外泌體載藥實驗服務(wù)
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。安徽外泌體載藥納米的制備方法人臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞作為白介素21基因傳遞載體，可用于裸鼠的上皮性卵巢aizhiliao。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——超高速離心法。其中超高速離心法是常用的,該方法是被譽為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。因操作簡單,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對較低而被廣fan使用。但是該方法耗時、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。所以得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都不高。
在藥物遞送系統(tǒng)中，理想的載體應(yīng)該是安全、有效,并且有很好的生物利用度。同時,載體的穩(wěn)定性,低的細(xì)胞毒性和免疫原性,以及能否成功地將藥物運送到特定的組織或細(xì)胞也是至關(guān)重要的。外泌體作為藥物遞送系統(tǒng)具有一系列的優(yōu)點:(1)從患者的組織或血液收集(如骨髓、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞)的外泌體,載藥后可以逃避單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS)的qing除,從而減少藥物的qing除率。(2)外泌體具有潛在的靶向性,可以增加藥物輸送到靶組織的能力[10]。(3)外泌體膜的特定脂質(zhì)體和蛋白質(zhì),使得外泌體可以直接與靶細(xì)胞膜融合,從而明顯提高藥物進(jìn)入細(xì)胞的可能性。(4)外泌體載體可以避開內(nèi)吞途徑的內(nèi)化,而且外泌體的安全性在許多臨床試驗已經(jīng)得到證實。外泌體內(nèi)源性載yao方式即先將藥物載入供體細(xì)胞中，當(dāng)藥物分選進(jìn)入外泌體并釋放外泌體后分離純化而獲。
外泌體作為一種潛在的理想型藥物遞送載體，可以利用化學(xué)和基因工程等方法對其進(jìn)行內(nèi)部及膜表面工程化改造，將化學(xué)藥物、功能短肽、小干擾RNA等多種生物活性物質(zhì)包載到外泌體中，可實現(xiàn)特定類型的細(xì)胞或組織的靶向藥物遞送。目前，常用的實現(xiàn)外泌體包載藥物方法有膜融合法、電穿孔法及基因工程法等。膜融合法-利用外泌體句有磷脂雙分子層膜結(jié)構(gòu)這一特性，可使用共孵育、聚碳酸酯膜擠壓等外源性方法使外泌體與其他類型膜結(jié)構(gòu)或藥物融合。電穿孔法-也叫電轉(zhuǎn)染，是一種新型外泌體包載核酸藥物的生物技術(shù)?；蚬こ谭?外泌體的基因修飾是將目的基因轉(zhuǎn)入供體細(xì)胞，使外泌體膜上功能配體過表達(dá)的一種可行策略?？诜f送裝載紫杉醇(PAC)的外泌體作用于人肺ai荷瘤小鼠,其中流的生長明顯受到抑制。安徽動物血液樣本外泌體載藥價格比較
外泌體裝載PTX，磷脂雙分子層可直接靶向融合細(xì)胞，增加PTX的細(xì)胞內(nèi)化量，提高藥物zhiliao效果。天津動物血液樣本外泌體載藥實驗服務(wù)
中流細(xì)胞的異常增殖和高遷移水平是惡性中流細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要特征。通過實驗可以用含藥外泌體DATS-Exo、空白外泌體Exo和DATS處理B16BL6細(xì)胞24h后,然后采用MTT的方法檢測細(xì)胞的增殖活性。實驗結(jié)果顯示,DATS-Exo與DATS都能夠有效抑制B16BL6細(xì)胞的增殖,且與DATS組相比,DATS-Exo的抑制作用更強。通過經(jīng)典的劃痕法考察含藥外泌體DATS-Exo的抑制中流細(xì)胞水平遷移能力，DATS-Exo組與DATS組相比具有更強的抑制效果。實驗結(jié)果表明,將大蒜素DATS制備成外泌體載藥系統(tǒng)是可以明顯提高其體外抗中流細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力。天津動物血液樣本外泌體載藥實驗服務(wù)
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