肝病中瘤免疫與自噬的關(guān)系尚未完全明確。研究表明，缺乏自噬的肝臟Kupffer細(xì)胞可以通過mtROS-NF-κB-IL-1a/b通路促進(jìn)肝硬化和肝病發(fā)展。自噬缺陷協(xié)同脂質(zhì)堆積可造成肝內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞耗竭。細(xì)胞自噬還被證實(shí)可被誘導(dǎo)增強(qiáng)TGFβ介導(dǎo)的抗瘤作用，IFNγ可通過非凋亡性細(xì)胞死亡抑制Huh7肝病細(xì)胞增殖，敲除自噬后，IFNγ抑制肝病細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)肝病細(xì)胞死亡的作用消失。研究表明自噬可通過抑制抑病基因的表達(dá)或活化原病基因促進(jìn)肝病發(fā)生。在ATG5敲除的小鼠模型中，由于自噬缺陷，抑病基因p53表達(dá)增加，小鼠只發(fā)生肝良性瘤而不惡變。這進(jìn)一步提示，自噬在肝病發(fā)生中的作用及機(jī)制非常復(fù)雜，可能受到諸多因素調(diào)控，但其重要性則毋庸置疑，仍需更多的研究探索其機(jī)制。誘導(dǎo)與吞噬泡形成：為應(yīng)對(duì)多種刺激，通過形成一種獨(dú)特的平整細(xì)胞膜（吞噬泡）誘導(dǎo)自噬。山東自噬RFP-GFP-LC3B
當(dāng)自噬體與溶酶體融合后，形成自噬溶酶體。自噬性溶酶體是一種自體吞噬泡,作用底物是內(nèi)源性的,即細(xì)胞內(nèi)的蛻變、破損的某些細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)。這種溶酶體普遍存在于正常的細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)起“清道夫”作用，作為細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器和其它結(jié)構(gòu)自然減員和更新的正常途徑。在組織細(xì)胞受到各種理化因素傷害時(shí)，自噬性溶酶體大量增加的，因此對(duì)細(xì)胞的損傷起一種保護(hù)作用。自噬性溶酶體的作用底物是內(nèi)源性的，即來自細(xì)胞內(nèi)的衰老和崩解的細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)等。它們由單層膜包圍，內(nèi)部常含有尚未分解的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和高爾基復(fù)合體或脂類、糖原等。正常細(xì)胞中的自噬性溶酶體在消化、分解、自然更替一些細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)上起著重要作用。當(dāng)細(xì)胞受到藥物作用、射線照射和機(jī)械損傷時(shí)，其數(shù)量明顯地增多。在病變的細(xì)胞中也?？梢姷阶允尚匀苊阁w。自噬性溶酶體是一種自體吞噬泡,作用底物是內(nèi)源性的,即細(xì)胞內(nèi)的蛻變、破損的某些細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)。河南自噬間歇性活化自噬對(duì)于藥物副作用突出的患者更為有利。
在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3等融合蛋白來示蹤自噬形成（常用）：GFP-LC3單熒光指示體系。由于電鏡耗時(shí)長(zhǎng)，不利于監(jiān)測(cè)（Monitoring）自噬形成。我們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了GFP-LC3指示技術(shù)：無自噬時(shí)，GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時(shí)，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個(gè)明亮的綠色熒光斑點(diǎn)，一個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于一個(gè)自噬體，可以通過計(jì)數(shù)來評(píng)價(jià)自噬活性的高低。研載生物已開發(fā)出高效的評(píng)價(jià)用GFP-LC3病毒載體，通過瞬時(shí)高效傳染細(xì)胞，配合活細(xì)胞工作站成功評(píng)價(jià)自噬流。
在大腦自噬的過程中，可以增強(qiáng)線粒體功能（細(xì)胞中產(chǎn)生能量的部分），保持線粒體平穩(wěn)運(yùn)行，會(huì)讓細(xì)胞可以產(chǎn)生更多的能量來為你的身體提供能量。自噬可以觸發(fā)細(xì)胞死亡，清理已經(jīng)被活性氧氧化應(yīng)激所破壞而無法修復(fù)的細(xì)胞（包括舊有的和新有的），損壞細(xì)胞死亡時(shí)，它們?yōu)樾碌募?xì)胞進(jìn)入并接管提供了空間。自噬就像對(duì)細(xì)胞進(jìn)行大掃除，在自噬過程中，你體內(nèi)的老的細(xì)胞膜，細(xì)胞器，其他細(xì)胞碎片，會(huì)被移除，重新?lián)Q成全新的部件。用更閃亮的新版本替換所有舊的或損壞的部件。你的細(xì)胞會(huì)變得更年輕，從而使身體更加高效的運(yùn)行。總之，自噬可以幫助你更長(zhǎng)壽，更年輕，恢復(fù)的更快，你可以每天做一些事情來啟動(dòng)細(xì)胞自噬，刺激細(xì)胞自噬來使它們更新。推動(dòng)關(guān)系中自噬并不直接參與誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，而是作為能量供應(yīng)者保障凋亡順利進(jìn)行。
細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)或阻止后，需對(duì)自噬過程進(jìn)行觀察和檢測(cè)，常用的策略和技術(shù)有：1、利用WesternBlot檢測(cè)LC3-II/I比值的變化以評(píng)價(jià)自噬形成自噬形成時(shí)，胞漿型LC3（即LC3-I）會(huì)酶解掉一小段多肽，轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低。（注意：LC3抗體對(duì)LC3-II有更高的親和力，會(huì)造成假陽(yáng)性。方法2和3需結(jié)合使用，同時(shí)需考慮溶酶體活性的影響。）2、檢測(cè)長(zhǎng)壽蛋白的批量降解：非特異。3、MDC（Monodansylcadaverine，單丹磺酰尸胺）染色：包括自噬體，所有酸性液泡都被染色，故屬于非特異性的。4、CellTrackerTMGreen染色：主要用于雙染色，但其能染所有的液泡，故也是屬于非特異性的。自噬在肝病發(fā)生中的作用及機(jī)制復(fù)雜，受到諸多因素調(diào)控，但其重要性毋庸置疑，仍需更多的研究探索其機(jī)制。杭州細(xì)胞自噬GFP-LC3B
當(dāng)自噬體與溶酶體融合后，因GFP熒光的部分淬滅而以紅色斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來。山東自噬RFP-GFP-LC3B
自噬是一個(gè)吞噬自身細(xì)胞質(zhì)蛋白或細(xì)胞器并使其包被進(jìn)入囊泡，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物的過程，借此實(shí)現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。自噬在機(jī)體的生理和病理過程中都能見到，其所起的作用是正面還是負(fù)面的尚未完全闡明，對(duì)病變的研究尤其如此，值得關(guān)注。自噬（autophagy）是由Ashford和Porter在1962年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有“自己吃自己”的現(xiàn)象后提出的，是指從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的無核糖體附著區(qū)脫落的雙層膜包裹部分胞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)需降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等成分形成自噬體（autophagosome），并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物，以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。山東自噬RFP-GFP-LC3B