全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠?qū)?50 nm的外泌體進行全方面的表征,無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進行純化,避免因純化帶來的樣本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群,在CD171過表達系統(tǒng)中,100 nm以上的外泌體只表達了CD171。通過抗體捕獲的模式,全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠量化含有不同標記物的外泌體亞群,并對不同種群的外泌體進行特異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化,并且線性范圍可跨越3個數(shù)量級。隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。江西血漿外泌體WB
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題, Wako 研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture? Exosome Isolation Kit PS)提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì),眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導向細胞膜內(nèi)側(cè),暴露在外泌體膜外側(cè)3)。另外,T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4 通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4)?;谏鲜鲋R,我們利用Tim4固化磁珠,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學醫(yī)學系免疫學華山教授共同開發(fā),并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。山東胸水外泌體透射電鏡檢測免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法。
外泌體即細胞分泌的直徑約40-100 nm的微小膜泡,多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。一開始被當做細胞排泄物,但是近幾年,研究發(fā)現(xiàn)外泌體可謂是小身體大作用。種瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移后,如何靶向呈遞藥物一直是種瘤醫(yī)治中的一個巨大挑戰(zhàn)。發(fā)表于Nano Lett的一項研究中,研究人員利用外泌體制備藥物的遞送系統(tǒng)(LD-MDS),并取得成功。在這項研究中,研究人員將相關藥物錨定在活巨噬細胞膜上,細胞自身相關蛋白酶響應開啟并將藥物轉(zhuǎn)載進入外泌體,順利遞送至肺轉(zhuǎn)移灶并且轉(zhuǎn)化為納米囊泡和次級納米囊泡,促進轉(zhuǎn)移性4T1病細胞的有效內(nèi)化和細胞死亡。之后,受損的4T1病細胞可以釋放次級納米囊泡和游離藥物分子,再破壞鄰近的病細胞。研究顯示, LD-MDS對體內(nèi)直徑小于100μm的肺轉(zhuǎn)移病灶顯示出優(yōu)異的靶向效率,并顯著壓制肺轉(zhuǎn)移。
理論上,所有促進肺病細胞分泌外泌體的機制都可以被用來作為肺病醫(yī)治的潛在靶點,但目前關于其可行性的研究還比較少。有研究表明,種瘤來源的外泌體對種瘤免疫的調(diào)控具有一定的影響作用,包括免疫壓制和免疫開啟兩個方面。Romagnoli等研究發(fā)現(xiàn),肺病細胞可以刺激樹突狀細胞等抗原提呈細胞產(chǎn)生攜帶特異抗原的外泌體,這些外泌體可以遷移到區(qū)域淋巴結(jié),進而開啟CD4+T與CD8+T細胞產(chǎn)生抗種瘤免疫反應,進而壓制種瘤生長。Besse等研究發(fā)現(xiàn),在晚期NSCLC患者中,裝載有IFN-γ,MHC I和MHCⅡ限制抗原的樹突狀細胞外泌體增強了NK細胞的抗種瘤免疫功能,研究證實外泌體參與相關種瘤生理病理過程,在NSCLC免疫醫(yī)治中有著重要的臨床應用價值,為NSCLC的醫(yī)治打開了新的視野。類風濕關節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。
外泌體的組成較為復雜,其內(nèi)含有多種生物大分子,如:核酸(雙鏈DNA和各種RNA亞型)、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進入血液循環(huán),而后被靶細胞吸收,從而調(diào)節(jié)靶細胞基因表達和細胞功能。此外,外泌體相關的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子,調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達,參與細胞分化、細胞凋亡及細胞信號的傳導。有研究表明,外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強種瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、介導種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進而促進種瘤的發(fā)發(fā)展。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。植物外泌體lncRNA測序
外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。江西血漿外泌體WB
所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7 和 RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。江西血漿外泌體WB