遼寧腹水外泌體粒徑檢測

來源: 發(fā)布時間:2021-10-19

隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn),近年來,應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。例如,血液中的成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體,可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的移動和增殖以及血管新生來促進(jìn)傷口愈合。有報導(dǎo)指出,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。從癥狀患者樹突狀細(xì)胞釋放的外泌體中,含有各種癥狀細(xì)胞來源的蛋白質(zhì),可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。利用此功能的抗種瘤免疫療法,目前正處于初期臨床研究階段。突狀細(xì)胞釋放的外泌體可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。遼寧腹水外泌體粒徑檢測

目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法,但這些方法混有非常多的雜質(zhì),必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定,不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機(jī)、無法進(jìn)行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難,需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此,日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸(PS)法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠,再經(jīng)過含有EDTA的洗脫緩沖液進(jìn)行分離,提取高純度的完整外泌體。湖南外泌體提取外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。

l 慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達(dá):將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中,隨后用此慢病毒傳播細(xì)胞,使細(xì)胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究:將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中,與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),觀察細(xì)胞的功能變化,如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等;或者將外泌體注射入動物模型中,觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜,直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而開啟靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而開啟細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA??茖W(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。

l 納米顆粒追隨分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。l Western blot分子標(biāo)志物檢測:外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);參與生物功能的分子,如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X(ALIX)、種瘤易感基因101蛋白(TSG101)、熱休克蛋白(HSP70、HSP90),以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白。外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸,可以運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病醫(yī)治。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。遼寧細(xì)胞外泌體鑒定

外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml。遼寧腹水外泌體粒徑檢測

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個重要模式,作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。然而,我們對于EV形成的分子機(jī)制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì),總結(jié)了其生物學(xué)效應(yīng),特別是免疫系統(tǒng),討論了分泌囊泡可能作為細(xì)胞間信使的潛在作用。遼寧腹水外泌體粒徑檢測