北京雙熒光自噬慢病毒

來源: 發(fā)布時間:2022-03-02

自噬過程的調控:從上面總結的自噬特點中可以看出,自噬這一過程一旦啟動,必須在度過危機后適時停止,否則,其非特異性捕獲胞漿成分的特性將導致細胞發(fā)生不可逆的損傷。這也提醒我們在研究自噬時一定要動態(tài)觀察,任何橫斷面的研究結果都不足以評價自噬的活性。目前,已經報告了許多因素能誘導細胞發(fā)生自噬,如饑餓、生長因子缺乏、微生物傳染、細胞器損傷、蛋白質折疊錯誤或聚集、DNA損傷、放療、化療等等,這么多刺激信號如何傳遞的、哪些自噬蛋白接受信號、又有哪些自噬蛋白去執(zhí)行等許多問題都還在等待進一步解答中。關于傳遞自噬信號的通路目前比較肯定的有:阻止類ClassIPI3Kpathway(PI-phosphatidylinositol,磷脂酰肌醇)與IRS(Insulinreceptorsubstrate)結合,接受胰島素受體傳來的信號(血糖水平高阻止自噬)。細胞自噬過程中損壞的蛋白或細胞器被雙層膜結構的自噬小泡包裹后,送入溶酶體或液泡中進行降解并循環(huán)利用。北京雙熒光自噬慢病毒

 GFP-LC3病毒系統(tǒng)可高效ganran目的細胞,表達GFP-LC3,ganranganran后細胞可在熒光顯微鏡下實時觀察自噬的整體水平;由于電鏡耗時長,不利于監(jiān)測自噬形成。我們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了GFP-LC3指示技術:無自噬時,GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中;自噬形成時,GFP-LC3融合蛋白轉位至自噬體膜,在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點,一個斑點相當于一個自噬體,可以通過計數(shù)來評價自噬活性的高低。研載生物已開發(fā)出高效的評價用GFP-LC3病毒載體,通過瞬時高效ganran細胞,配合活細胞工作站成功評價自噬流。上海雙熒光自噬慢病毒包裝啟動人體骨骼肌自噬的有效策略是運動強度,劇烈運動是肌肉自噬的較有效誘因。

自噬與疾?。?、自噬與代謝:自噬能清理不正常構型的蛋白質,并消化受損和多余的細胞器,是真核細胞中普遍存在的降解/再循環(huán)系統(tǒng)。在細胞新陳代謝、結構重建、生長發(fā)育中起著重要作用。在饑餓和新生兒早期,自噬作用明顯加強,自噬體明顯增多。2、自噬與腫細胞:細胞自噬與細胞的關系十分復雜,目前尚未完全闡明。一方面,正常細胞自噬增強,可表現(xiàn)出阻止腫細胞發(fā)生的功能;與此相反,阻止細胞自噬有潛在的致瘤可能。另一方面,腫細胞也可通過增強細胞自噬來對抗由缺氧、代謝產物、診治藥物誘導的應激反應。自噬基因的突變可以導致遺傳病,自噬機制受到的擾亂還與病癥有關。

在細胞自噬的過程中,其C端暴露的甘氨酸經過一個類似泛素化的過程,以ATG7為E1樣jihuo酶(E1-like activating enzyme), 以ATG3為E2樣連接酶(E2-like conjugation enzyme),以Atg12-Atg5-Atg16復合物為E3樣連接酶(E3-like ligase),在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬體(autophagosome)的內膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后,自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬體內膜上的LC3B II則被溶酶體內的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大,但由于其極強的疏水性,在SDS-PAGE電泳時,LC3B II比LC3B I遷移得更快,其表觀分子量分別為14kD和16kD。自噬的調控機制在肝病發(fā)生的發(fā)展的不同階段可能起到不同的作用。

伴隨著衰老,造血干細胞(HSC)逐漸會失去造血再生的能力,其結果是導致疾病的發(fā)生。自噬是細胞的一種生理過程,實際上與健康、長壽和保護HCS免于應激有關。如果自噬功能失去,其結果是導致線粒體堆積和代謝增強,進而加速粒細胞的分化,造成HSC表型失調,降低其再生能力。實際上,在大部分正常衰老的大鼠中也會出現(xiàn)這一問題。然而,有大約1/3的衰老HSC表現(xiàn)為高自噬水平、低代謝速率和明顯的長期再生能力。這一點和年輕的HSC差不多。我們的結果顯示,自噬能夠明顯抑制HSC的代謝,能夠清理線粒體堆積,保持自我的再生能力。效表達紅色熒光蛋白、綠色熒光蛋白和LC3B的融合蛋白,呈現(xiàn)明亮的紅色和綠色熒光,可以用于細胞自噬的檢測。河南western blot檢測自噬流

自噬體能夠與晚期內體融合形成中間囊泡終形成自噬溶酶體。北京雙熒光自噬慢病毒

我們并不需要做長時間的斷食來增進自噬,自噬作用是細胞回收自身沒用的部分,來使身體更有效率,是個非??岬倪^程,但它不只有在斷食時才會發(fā)生。首先,我推崇間歇性斷食,但有一些方法可以不用忍受斷食就能增進自噬,或者配合間歇性斷食加入這些方法,更能促進自噬作用。心肺運動是經證實能增進自噬的方法之一,在《自噬》刊物發(fā)表的一篇研究發(fā)現(xiàn),進行有氧運動時周圍組織會誘發(fā)自噬,像是肝臟、肌肉、心臟,甚至是大腦,簡單來說,這是對壓力源的適應。北京雙熒光自噬慢病毒