全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標(biāo)記物,并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。建議在表征外泌體和外囊泡時,應(yīng)當(dāng)同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體,探測膜內(nèi)蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)只測量含有靶標(biāo)抗原的特定細(xì)胞外泌體群體。只需35 μL的稀釋樣品,即可直接獲得外泌體的表型、粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔(dān)心污染物對測試的影響。在過去幾年中,有幾個實驗室報道了各種細(xì)胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學(xué)功能。江西血漿外泌體WB
由于這些胞外囊泡(EV)與生理和病理狀況之間的關(guān)系,人們對EV的興趣呈指數(shù)增長。 EVs對新型診斷和臨床轉(zhuǎn)化有很大希望。近的研究已經(jīng)將這些交流所需的一些任務(wù)歸結(jié)為細(xì)胞外囊泡(如外泌體和微泡),主要參與髓鞘膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元之間的相互信號傳遞從而促進神經(jīng)元存活、由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認(rèn)為是神經(jīng)變性疾病和腦病擴散的重要因素。這些細(xì)胞外囊泡功能為以前無法識別的神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)跨細(xì)胞相互作用增加了新方式。江西血漿外泌體WB因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。
外泌體是由各種細(xì)胞分泌的小型膜囊泡(直徑30~100nm),存在于大多數(shù)體液(如血液、尿液、髓液等)和細(xì)胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質(zhì)雙層膜包被的膜囊泡,產(chǎn)生于稱為多囊泡體的細(xì)胞外囊泡中,多囊泡體通過與細(xì)胞膜融合將外泌體釋放到細(xì)胞外。外泌體含核內(nèi)體來源的蛋白質(zhì)(如ESCRTs)、細(xì)胞內(nèi)運輸相關(guān)蛋白(如RabGTPase等)及細(xì)胞膜來源蛋白(如CD63, CD81等)等各種內(nèi)分泌細(xì)胞來源的蛋白和RNA,同時還含有分泌細(xì)胞膜來源和內(nèi)體膜來源的脂質(zhì)(如膽固醇和鞘磷脂等)。
外泌體免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài) 的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH 和非 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性, 不便進行下一步的實驗 。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9 《Scientific Reports》 雜志發(fā)表了該方法新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在 電鏡下大小均 一, 但是需要特殊的設(shè)備 , 應(yīng)用不普遍 。外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。
l 慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達:將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中,隨后用此慢病毒傳播細(xì)胞,使細(xì)胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究:將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中,與受體細(xì)胞進行共培養(yǎng),觀察細(xì)胞的功能變化,如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等;或者將外泌體注射入動物模型中,觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。外泌體(exosomes)是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜,直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重復(fù)性好。湖北外泌體融合實驗
外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標(biāo)記。江西血漿外泌體WB
樣本預(yù)處理與外泌體分離、保存:外泌體存在于人類或動物的各種體液中,我們可以選擇不同的樣本來源進行相關(guān)的外泌體研究。由于外泌體是來源于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷的含有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的多泡小體,分布于胞外基質(zhì)。為了獲得高純度的外泌體,必須確保有效去除所有的細(xì)胞碎片及其他不需要的雜質(zhì)。不同的實驗樣本采集時需要注意的地方不一樣,如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清培養(yǎng)、血漿樣本采集時用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集時需要加抑菌劑等。江西血漿外泌體WB