為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問題, Wako 研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture? Exosome Isolation Kit PS）提取高純度細(xì)胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì)，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細(xì)胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，暴露在外泌體膜外側(cè)3）。另外，T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4（Tim4 通過巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4）?；谏鲜鲋R，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā)，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡。湖南血漿外泌體WB
幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及種瘤醫(yī)治領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。福建血清外泌體鑒定外泌體特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠?qū)?50 nm的外泌體進(jìn)行全方面的表征，無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進(jìn)行純化，避免因純化帶來的樣本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群，在CD171過表達(dá)系統(tǒng)中，100 nm以上的外泌體只表達(dá)了CD171。通過抗體捕獲的模式，全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠量化含有不同標(biāo)記物的外泌體亞群，并對不同種群的外泌體進(jìn)行特異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化，并且線性范圍可跨越3個數(shù)量級。
l 慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達(dá)：將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中，隨后用此慢病毒傳播細(xì)胞，使細(xì)胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究：將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中，與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的功能變化，如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等；或者將外泌體注射入動物模型中，觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。外泌體（exosomes）是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜，直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)?？贵w親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體。
外泌體免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài) 的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH 和非 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性， 不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn) 。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9 《Scientific Reports》 雜志發(fā)表了該方法新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在 電鏡下大小均 一， 但是需要特殊的設(shè)備 ， 應(yīng)用不普遍 。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡，由大多數(shù)細(xì)胞分泌。湖南血漿外泌體WB
從癥狀患者樹突狀細(xì)胞釋放的外泌體中，含有各種癥狀細(xì)胞來源的蛋白質(zhì)。湖南血漿外泌體WB
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。一類外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7 和 RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。湖南血漿外泌體WB