在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案,以達(dá)到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號通路等??偠灾饷隗w的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施,造福更多的患者。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。血漿外泌體western blot
當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、種瘤侵襲等方方面面。有研究表明種瘤來源的外泌體參與到種瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了種瘤的生長與侵襲。遼寧腹水外泌體透射電鏡檢測與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目。
外泌體是由各種細(xì)胞分泌的小型膜囊泡(直徑30~100nm),存在于大多數(shù)體液(如血液、尿液、髓液等)和細(xì)胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質(zhì)雙層膜包被的膜囊泡,產(chǎn)生于稱為多囊泡體的細(xì)胞外囊泡中,多囊泡體通過與細(xì)胞膜融合將外泌體釋放到細(xì)胞外。外泌體含核內(nèi)體來源的蛋白質(zhì)(如ESCRTs)、細(xì)胞內(nèi)運輸相關(guān)蛋白(如RabGTPase等)及細(xì)胞膜來源蛋白(如CD63, CD81等)等各種內(nèi)分泌細(xì)胞來源的蛋白和RNA,同時還含有分泌細(xì)胞膜來源和內(nèi)體膜來源的脂質(zhì)(如膽固醇和鞘磷脂等)。
多年來,外泌體被認(rèn)為參與無用的細(xì)胞內(nèi)含物質(zhì)的釋放。但是近年來,外泌體在活內(nèi)作為運載脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA等細(xì)胞間信息傳遞的新型媒介而倍受矚目。隨著其功能在生理及病理功能的闡明,外泌體在臨床應(yīng)用的相關(guān)研究中,特別是診斷醫(yī)治、生物標(biāo)記的開發(fā)也迅速發(fā)展起來。現(xiàn)在,外泌體研究幾乎涉及所有的研究領(lǐng)域(免疫、神經(jīng)系統(tǒng)、癥狀、內(nèi)分泌、循環(huán)系統(tǒng)等)。例如,免疫細(xì)胞來源的外泌體含有抗原肽/MHC復(fù)合體和可能控制著免疫細(xì)胞間抗原信息的交換、免疫細(xì)胞活化/非活化等各種免疫應(yīng)答機(jī)制的各種抗原。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。
肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激種瘤血管的形成來促進(jìn)種瘤的生長。據(jù)相關(guān)報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)種瘤血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,遷移能力。結(jié)果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。血漿外泌體western blot
確認(rèn)外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機(jī)制,通過促進(jìn)或壓制釋放機(jī)制。血漿外泌體western blot
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠在單個外泌體樣本上檢測多達(dá)4種標(biāo)記物,并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。建議在表征外泌體和外囊泡時,應(yīng)當(dāng)同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體,探測膜內(nèi)蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)只測量含有靶標(biāo)抗原的特定細(xì)胞外泌體群體。只需35 μL的稀釋樣品,即可直接獲得外泌體的表型、粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔(dān)心污染物對測試的影響。血漿外泌體western blot