外泌體直接載yao方式包括皂苷處理法、孵育法、凍融循環(huán)法、超聲法和擠出法等。皂苷處理法指共培養(yǎng)外泌體、藥物和皂苷溶液,然后通過透析膜、色譜柱純化得到載藥外泌體的方法。孵育法指藥物和外泌體在適宜的條件下共培養(yǎng)。凍融循環(huán)法是經(jīng)過冷凍、融化過程使外泌體包裹藥物。超聲法利用超聲波使藥物進(jìn)入外泌體中,擠出法利用擠出機(jī)實(shí)現(xiàn)外泌體載帶藥物。其中皂苷輔助藥物裝載方法是直接載yao方式中常用的一種載yao方式。上述方法也存在一些缺點(diǎn):孵育法操作簡(jiǎn)單,但載藥量低;凍融循環(huán)法、超聲法和擠出法對(duì)儀器的要求高,且可能會(huì)破壞外泌體的質(zhì)膜結(jié)構(gòu)造成藥物泄露,終造成載藥量不理想。外泌體載帶miR一26a、miR一200b等可用于抗中流、糖尿病性創(chuàng)傷、腸纖維化的zhiliao。北京外泌體載藥參考價(jià)格
多烯紫杉醇(docetaxel,DTX)是漿果紫杉針葉的提取物,屬于紫杉類抗中流藥物,用于乳腺ai、卵巢ai、非小細(xì)胞肺ai、前列腺ai等多種實(shí)體中流的zhiliao。多烯紫杉醇為脂溶xing藥物,難溶于水,目前臨床使用的多烯紫杉醇注射液使用吐溫-80、乙醇作為增溶劑增加溶解度,其不良反應(yīng)較大,臨床應(yīng)用受到很大的限制。采用電穿孔法將DTX裝載至外泌體中(DTX-EXO)。通過體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DTX-EXO在正常體液環(huán)境和中流環(huán)境句有一定的緩釋性能,在正常體液環(huán)境下能緩慢釋放,在中流部位則釋放速度加快,有利于減少細(xì)胞在正常組織中的毒副反應(yīng),增加中流部位的藥效。天津動(dòng)物細(xì)胞樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)價(jià)格比較在小鼠模型中利用外泌體裝載姜黃素和過氧化氫酶可證明其在神經(jīng)保護(hù)方面的作用。
通心絡(luò)膠囊是心腦血管病常用藥, 句有yi氣活xue, 通絡(luò)止痛的功效。選擇將通心絡(luò)膠囊處理過的人心肌細(xì)胞 (HCM) 與人心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (HCMECs) 缺氧/復(fù)氧模型共培養(yǎng), 結(jié)果顯示HCMECs的凋亡水平明顯下降, 而加入外泌體抑制劑GW4869后該作用消失, 證明HCM來(lái)源外泌體可作為通心絡(luò)膠囊有效成分的載體。研究者還發(fā)現(xiàn)通心絡(luò)膠囊處理過的HCM能提高HCMECs中p70s6k1和GSK-3β的磷酸化水平, 說(shuō)明通心絡(luò)膠囊可能通過HCM來(lái)源的外泌體激huo再灌注損傷挽救激酶通路, 進(jìn)而減少HCMECs的缺氧/復(fù)氧損傷。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子,已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來(lái)分離外泌體。目前,市場(chǎng)已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡(jiǎn)單不需要特殊的儀器,但是價(jià)格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進(jìn)行外泌體的提取,此方法實(shí)行起來(lái)較為簡(jiǎn)單。包載厚樸酚的外泌體比游離厚樸酚有更高的zhiliao功效,可改善細(xì)胞攝取從而提高抗中流功效。
疏水性的小分子藥物如紫杉醇、紫衫酚、阿霉素(DOX)、姜黃素等可以通過與分離純化的外泌體共孵育,將藥物負(fù)載到外泌體中。這種方法的載藥量往往較低,通過高效液相色譜檢測(cè)紫衫醇的載藥量一般為7.2%,DOX的載藥量一般為11.2%。為了達(dá)到高效負(fù)載藥物的目的,研究人員采用了電穿孔、擠出、輔助超聲、低滲透析等一系列載yao方式將疏水性卟啉化合物載入到外泌體中。研究結(jié)果顯示,電穿孔法、擠出、超聲、低滲透析等一系列載yao方式都可以提高卟啉化合物的載藥量。尤其是超聲和低滲透析方法可以提高卟啉化合物的載藥量到11倍?;贖EK293T細(xì)胞來(lái)源外泌體的載藥系統(tǒng),增加了外泌體在中流內(nèi)的彌散、滲透性。重慶外泌體載藥hplc
將藥物載入外泌體的方法主要有兩種:前轉(zhuǎn)載和后轉(zhuǎn)載。北京外泌體載藥參考價(jià)格
PTX是一種天然的抗中流藥物, 已在臨床上廣fan應(yīng)用, 但因其句有劑量依賴性毒性、水溶性差和靜脈注射zhiliao效果較差等問題限制了PTX使用。在異種中流移植的裸小鼠肺ai模型中, 使用牛奶來(lái)源的外泌體作為PTX的藥物載體, 經(jīng)口服給藥結(jié)果顯示, 負(fù)載PTX的外泌體句有良好的耐酸性和穩(wěn)定性, 能明顯抑制中流的生長(zhǎng), 并且較靜脈給藥明顯降低了藥物本身毒性與免疫反應(yīng)。有實(shí)驗(yàn)利用超聲引導(dǎo)巨噬細(xì)胞來(lái)源外泌體裝載PTX, 發(fā)現(xiàn)外泌體載藥組較傳統(tǒng)給yao方式對(duì)P-gp陽(yáng)性耐藥細(xì)胞的細(xì)胞毒性增加了50倍以上, 對(duì)Lewis肺ai自發(fā)轉(zhuǎn)移模型句有很強(qiáng)的殺傷作用, 說(shuō)明以外泌體為載體的PTX句有改善化療藥物耐藥性, 增強(qiáng)抗ai效果的潛能。北京外泌體載藥參考價(jià)格
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