大自噬，也就是通常說的自噬，是真核細(xì)胞蛋白降解的途徑之一。自噬可以被描述為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的成分（細(xì)胞器、蛋白等）被雙層膜的囊泡包裹，形成自噬體，進(jìn)而傳遞到溶酶體進(jìn)行降解的過程。詳細(xì)來說，自噬過程與內(nèi)涵體途徑密不可分。一方面，自噬體能夠與晚期內(nèi)體融合形成中間囊泡終形成自噬溶酶體；另一方面，自噬體能夠直接與溶酶體融合形成自噬溶酶體。無論通過哪條途徑，自噬溶酶體較終通過酸性水解酶將細(xì)胞器、蛋白等消化分解。細(xì)胞本底水平的自噬發(fā)生在營養(yǎng)充足的條件下，可保護(hù)細(xì)胞免受錯誤折疊蛋白或受損細(xì)胞器的影響，從而防止某些疾病的發(fā)生（如神經(jīng)退行性疾病和病癥）。饑餓等也可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，通過降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器為細(xì)胞活動提供營養(yǎng)和能量。Hhcy小鼠在腦缺血后，腦組織中同型半胱氨酸（Hcy）水平增加，激huo細(xì)胞自噬。江西mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬
目前，預(yù)防肝病發(fā)生或瘤進(jìn)展的疫苗研究正在開展，其中已報道過自噬在其中產(chǎn)生影響的疫苗有自噬相關(guān)基因疫苗、DC疫苗、病毒疫苗和瘤抗原疫苗。如前所述，自噬在早期階段主要起抑制肝病發(fā)生作用，但在后期發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中則主要起促進(jìn)作用，有研究表明針對自噬配體蛋白p62的編碼DNA的疫苗可以有效抑制肝病的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，但該實驗只停留在狗、大鼠和小鼠模型，只在大鼠模型中進(jìn)行了較小毒性劑量的測定。使用瘤細(xì)胞源自噬體刺激DC產(chǎn)生的疫苗研究表明，相比于只接種DC疫苗的肝病小鼠模型，接種瘤細(xì)胞源自噬體刺激獲得的成熟DC疫苗的小鼠出現(xiàn)明顯的特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，抗瘤效應(yīng)明顯，瘤生長明顯受到抑制。山東細(xì)胞自噬溶酶體分子伴侶介導(dǎo)的自噬發(fā)生在許多組織中，主要功能有長期饑餓時為細(xì)胞供能，調(diào)節(jié)代謝通路，清理無用蛋白質(zhì)等。
氯喹及其衍生物羥基氯喹zhiliao小細(xì)胞肺ai、原位導(dǎo)管ai、原發(fā)性腎ai、乳腺ai等目前已經(jīng)進(jìn)入臨床I期或II期研究階段, 但是關(guān)于抑制自噬zhiliao中流的觀點受到很多質(zhì)疑。首先, 沒有證據(jù)判斷氯喹是通過抑制溶酶體活性還是與溶酶體無關(guān)的其他作用發(fā)揮抗中流效應(yīng)的。其次, 也有觀點認(rèn)為自噬可能是化療過程中促進(jìn)中流細(xì)胞死亡的機制。因為敲低自噬關(guān)鍵蛋白后阻礙了化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。此外, 眾多證據(jù)顯示, 有些活化自噬的藥物同樣具有抗中流作用。用于預(yù)防家族性乳腺ai的他莫昔芬能夠誘導(dǎo)自噬活化。
自噬發(fā)生過程：在此過程中，自噬體的形成是關(guān)鍵，其直徑一般為300~900nm，平均500nm，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等。與其他細(xì)胞器相比，自噬體的半衰期比較短，只有8min左右，說明自噬是細(xì)胞對于環(huán)境變化的有效反應(yīng)。在整個自體吞噬過程中,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器都受到破壞,較明顯的是線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受損。雖然自體吞噬并不直接破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核,但是有證據(jù)表明,在較初斷裂或消化后,細(xì)胞膜和細(xì)胞核會較終變成溶酶體以消化和分解自身。明確自噬的具體機制可有益于新疫苗的研發(fā)，可為肝病預(yù)防提供潛在的靶點。
我國肝病發(fā)生的原因多見于慢性HBV和HCV沾染，此外還與酒精性及非酒精性脂肪肝相關(guān)。HBV誘導(dǎo)的肝細(xì)胞自噬通常是由HBVx蛋白誘導(dǎo)的，HBx是HBVx基因編碼的一種多功能潛在性蛋白，在慢性肝炎、肝硬化和肝病中發(fā)揮重要作用。HBx可通過抑制Beclin1與bcl-2結(jié)合和JNK-ROS信號通路啟動自噬。其他HBV蛋白如HBsAg可通過與折疊錯誤的蛋白結(jié)合誘導(dǎo)自噬。但有趣的是，自噬的發(fā)生在肝病中的作用是一個復(fù)雜的雙向調(diào)節(jié)過程，雖然HBx和HBsAg可通過不同途徑啟動和誘導(dǎo)自噬發(fā)生，但HBx在體內(nèi)同時發(fā)揮出另一方面的作用，通過對ATP酶與mTOR的誘導(dǎo)，導(dǎo)致溶酶體酸化和降解能力降低，兩方面共同作用下，然后體內(nèi)自噬作用是減弱的。自噬啟動的增加及溶酶體工作能力的降低，共同導(dǎo)致了p62堆積，從而促進(jìn)病毒沾染，導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死及凋亡增加。而p62的異常堆積可活化核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nrf2），啟動抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，使肝細(xì)胞在氧化應(yīng)激條件下增加病變風(fēng)險。研究主要集中在酵母及其它重要的單細(xì)胞真核生物,而對植物和哺乳動物細(xì)胞中的自體吞噬過程的了解則更少。江西mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬
自噬體與溶酶體融合，成為自溶體，一些被隔離的貨物被降解，然后回收以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。江西mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬
RFP是一種紅色熒光蛋白，當(dāng)其與GFP進(jìn)行LC3B的共同標(biāo)記時，在GFP被溶酶體酸性環(huán)境所淬滅的情況下，可以發(fā)出紅色熒光的RFP因為其zhuoyue的穩(wěn)定性而被保留。因此，通過融合表達(dá)RFP-GFP-LC3B蛋白，可以非常有效地追蹤自噬過程。在用RFP-GFP-LC3B慢病毒感染細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下RFP-GFP-LC3B以彌散的黃色熒光(RFP和GFP的綜合效果)形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下RFP-GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以黃色斑點的形式表現(xiàn)出來(LC3B dot or punctae)；當(dāng)自噬體與溶酶體融合后，因GFP熒光的部分淬滅而以紅色斑點的形式表現(xiàn)出來。江西mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬
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