Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進一步純化胎盤相關外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復驗證,確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。干細胞外泌體具有減少細胞凋亡、減輕炎癥反應、促進血管生成等功能。江西細胞上清外泌體染色
Caveolin-1(cav1)是稱為細胞膜穴樣內陷的質膜內陷的重要結構和信號成分,在脂肪細胞中含量豐富。正如之前報道的那樣,cav1基因(ad-cav1敲除[KO]小鼠)的脂肪細胞特異性消融不會導致蛋白質的消除,因為cav1蛋白質從鄰近的內皮細胞轉移到脂肪細胞。然而,這是小鼠功能性KO,因為脂肪細胞小窩結構已耗盡。與對照組相比,盡管葡萄糖刺激的胰島素分泌完全喪失、代謝組織中胰島素刺激的AKT激huo減弱以及部分脂肪代謝障礙,但采用高脂肪飲食(HFD)的ad-cav1KO小鼠顯示出全身葡萄糖清chu率有所改善。原因是白色脂肪組織(AT)增加了不依賴胰島素的葡萄糖攝取和減少了肝糖異生。此外,HFD喂養(yǎng)的ad-cav1KO小鼠表現(xiàn)出明顯的AT炎癥、纖維化、線粒體功能障礙和脂質代謝失調。ad-cav1KO小鼠的葡萄糖清chu表型至少部分由AT外泌體(AT-sEV)介導。向對照小鼠注射來自ad-cav1KO小鼠的AT-sEV表型復制ad-cav1KO特征。有趣的是,來自ad-cav1KO小鼠的AT-sEV將AT的表型傳播到肝臟。這些數(shù)據(jù)表明,ad-cav1對于AT健康適應營養(yǎng)過剩至關重要,并防止外泌體將負性表型異常傳播到其他organ。 湖北干細胞外泌體外泌體內的miRNA、lncRNA和cirRNA表達低,檢測難度大。
在Cancer Immunol Res雜志上的一篇文章,外泌體療法是否可以在檢查點難治性B16黑色素瘤模型中誘導對抗PD-1或PD-L1療法的敏感性研究發(fā)現(xiàn)。注射樹突狀細胞(DC)衍生的EV,而不是檢查點阻斷,可誘導有效的抗原特異性T細胞反應并減少荷瘤小鼠的腫瘤生長。在診治模型中,EV和抗PD-1或PD-L1的聯(lián)合療法增強了對裝載OVA和α-半乳糖神經(jīng)酰胺的EV的免疫反應。此外,聯(lián)合診治導致預防性tumour模型的存活率增加。這表明EV可以在檢查點難治性CA中誘導有效的抗腫瘤免疫反應,并在先前無反應的tumour模型中誘導抗PD-1或抗PD-L1反應。
細胞衍生的小細胞外囊泡(sEV)具有抗ai作用。然而,應加強它們的抗ai潛力以提高臨床適用性。在此,我們從通過柔性接頭在質膜上表達IL2的工程化JurkatT細胞生成了IL2-tetheredsEVs(IL2-sEVs),以誘導自分泌效應。IL2-sEVs在不影響調節(jié)性T(Treg)細胞的情況下增加CD8+T細胞的抗ai能力,并下調黑色素瘤細胞中的細胞和外泌體PD-L1表達,導致它們對CD8+T細胞介導的細胞毒性的敏感性增加.它對CD8+T細胞和黑色素瘤細胞的作用是由幾種IL2-sEV駐留microRNAs(miRNAs)介導的,它們的表達被IL2的自分泌作用上調。在miRNA中,miR-181a-3p和miR-223-3p顯著降低了黑色素瘤細胞中的PD-L1蛋白水平。有趣的是,miR-181a-3p在抑制Treg細胞活性的同時增加了CD8+T細胞的活性。IL2-sEVs抑制攜帶黑色素瘤的免疫活性小鼠的腫瘤進展,但不抑制免疫缺陷小鼠的腫瘤進展。IL2-sEVs與現(xiàn)有抗ai藥物的組合通過降低體內PD-L1表達顯著提高了抗ai療效。因此,IL2-sEVs是潛在的CA免疫診治劑,可通過重新編程miRNA水平來調節(jié)免疫細胞和ai細胞。 循環(huán)外泌體lncRNA-GC1有作為早期檢測胃ai進展的診斷價值。
細胞外囊泡(EV)在臨床診治診斷學中有多種應用。然而,目前分離等離子EV的技術存在繁瑣的程序和有限的產量。在此,我們報告了一種快速高效的EV分離平臺,即EV-FISHER,它由具有可裂解脂質探針(PO43--spacer-DNA-cholesterol,PSDC)的金屬有機框架構成。EV-FISHER通過膽固醇從血漿中誘捕EV,并用普通離心機將它們分離。捕獲的EV可以在隨后被脫氧核糖核酸酶I切割PSDC時釋放和收集。我們得出結論,EV-FISHER在時間(-0分鐘對240分鐘)、分離效率(對),以及分離要求(12,800g對135,000g)方面具有優(yōu)勢。除了在血漿中的穩(wěn)定性外,EV-FISHER還表現(xiàn)出與下游單EV流式細胞儀的良好兼容性,能夠鑒定glypican-1(GPC-1)EVs用于早期診斷、臨床分期和療效評估。這項工作描繪了一種有效的策略,可以將EV從復雜的生物流體中分離出來,具有促進基于EV的診治診斷學的潛力。 外泌體的形成始于細胞內陷,成熟于多囊泡胞內體,終于膜融合。江西細胞上清外泌體染色
中流外泌體內的lncRNA分子在一些中流相關疾病中具有重要的診斷應用價值。江西細胞上清外泌體染色
轉基因CD47過表達是改善異種移植物排斥反應和對多能干細胞的同種異體反應的一種令人鼓舞的方法,其功效與CD47表達水平相關。然而,CD47在連接后也會傳遞導致細胞功能障礙或死亡的信號,這引起了人們對過度表達CD47可能有害的擔憂。在這里,我們公布了細胞表面CD47的替代來源。我們表明,從過表達CD47(轉基因或天然)的正常或腫瘤細胞中釋放的細胞外囊泡,包括外泌體,可以在豬或人類細胞上誘導有效的CD47改變。與自體CD47一樣,細胞表面的CD47能夠與SIRPα相互作用以抑制吞噬作用。然而,自體而非改變的CD47誘導細胞死亡。因此,CD47改變提供了細胞表面CD47的替代來源,可以在不向細胞傳遞有害信號的情況下引發(fā)其抗吞噬功能。CD47變化也表明了一種先前未發(fā)現(xiàn)的Tumour誘導免疫抑制機制。我們的研究結果應該有助于進一步優(yōu)化CD47轉基因方法,該方法可以通過比較大限度地減少CD47過表達的有害影響來改善結果。 江西細胞上清外泌體染色
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