外泌體是由細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的晚期內(nèi)泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細(xì)胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu),不同類型細(xì)胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子,并在細(xì)胞外環(huán)境穩(wěn)定存在,而且通過傳遞供體細(xì)胞信息,調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細(xì)胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達(dá)胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,PLAP)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。中流來源的外泌體可誘導(dǎo)中流細(xì)胞增殖、促進(jìn)瘤變。黑龍江腹膜透析液外泌體粒徑檢測
外泌體運輸?shù)幕蝾愃幬镆部梢允莔iRNA,miRNA是一類非編碼的內(nèi)源性RNA,主要用于調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)。miRNA主要通過與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結(jié)合起到抑制基因表達(dá)和降解mRNA的作用。與siRNA不同,miRNA抑制mRNA的表達(dá)不需要完美的堿基配對,因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質(zhì)的表達(dá),而每種siRNA只針對一種蛋白質(zhì)。miRNA的運載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運載miRNA的優(yōu)良載體,并且利用外泌體運輸miRNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。杭州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)干細(xì)胞外泌體具有抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要生物學(xué)功能。
外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖, 基于抗原–抗體特異性識別和結(jié)合作用原理, 可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原, 而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì), 其結(jié)果用吸光度值表示, 該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá), 也可以瞬時讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠, 與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積, 該方法不jin具有高度特異性, 還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量,但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測量結(jié)果,因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測時,為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準(zhǔn),操作繁瑣。受檢測靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進(jìn)行分析,難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。外泌體復(fù)雜的內(nèi)容物被認(rèn)為是疾病診斷的無創(chuàng)或微創(chuàng)生物標(biāo)志物。
外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨特優(yōu)勢:(1)與正常細(xì)胞相比,病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式,外泌體的組成不同于來源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運輸方式,有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進(jìn)入血液、尿液等體液,囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾,有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性,通過對此類體液進(jìn)行分析可以實現(xiàn)疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測。示蹤病毒使用CD63作為生物標(biāo)記,通過將CD63與熒光蛋白偶聯(lián),帶熒光的膜蛋白會在表達(dá)至外泌體膜上。福建腹膜透析液外泌體粒徑檢測
中流細(xì)胞來源的外泌體能促進(jìn)中流的轉(zhuǎn)移。黑龍江腹膜透析液外泌體粒徑檢測
在利用外泌體運輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。黑龍江腹膜透析液外泌體粒徑檢測
研載生物科技(上海)有限公司成立于2017-10-23,同時啟動了以研載生物為主的外泌體實驗,細(xì)胞自噬實驗, 細(xì)胞功能實驗,鐵死亡實驗產(chǎn)業(yè)布局。業(yè)務(wù)涵蓋了外泌體實驗,細(xì)胞自噬實驗, 細(xì)胞功能實驗,鐵死亡實驗等諸多領(lǐng)域,尤其外泌體實驗,細(xì)胞自噬實驗, 細(xì)胞功能實驗,鐵死亡實驗中具有強(qiáng)勁優(yōu)勢,完成了一大批具特色和時代特征的醫(yī)藥健康項目;同時在設(shè)計原創(chuàng)、科技創(chuàng)新、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范等方面推動行業(yè)發(fā)展。我們強(qiáng)化內(nèi)部資源整合與業(yè)務(wù)協(xié)同,致力于外泌體實驗,細(xì)胞自噬實驗, 細(xì)胞功能實驗,鐵死亡實驗等實現(xiàn)一體化,建立了成熟的外泌體實驗,細(xì)胞自噬實驗, 細(xì)胞功能實驗,鐵死亡實驗運營及風(fēng)險管理體系,累積了豐富的醫(yī)藥健康行業(yè)管理經(jīng)驗,擁有一大批專業(yè)人才。公司坐落于放鶴路1088號,業(yè)務(wù)覆蓋于全國多個省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收,進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、社會協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。