外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應用——免疫親和層析法。利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產(chǎn)量低。分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時,ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。負載姜黃素的外泌體能促進抗精神類藥物作用下的細胞膽固醇外流, 減少因藥物不良反應造成的細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。天津動物組織樣本外泌體載藥實驗服務
中流細胞的異常增殖和高遷移水平是惡性中流細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要特征。通過實驗可以用含藥外泌體DATS-Exo、空白外泌體Exo和DATS處理B16BL6細胞24h后,然后采用MTT的方法檢測細胞的增殖活性。實驗結(jié)果顯示,DATS-Exo與DATS都能夠有效抑制B16BL6細胞的增殖,且與DATS組相比,DATS-Exo的抑制作用更強。通過經(jīng)典的劃痕法考察含藥外泌體DATS-Exo的抑制中流細胞水平遷移能力，DATS-Exo組與DATS組相比具有更強的抑制效果。實驗結(jié)果表明,將大蒜素DATS制備成外泌體載藥系統(tǒng)是可以明顯提高其體外抗中流細胞轉(zhuǎn)移的能力。廣東動物組織樣本外泌體載藥咨詢問價外泌體載yao方法-共孵育方法適用于親脂類藥物。
在醫(yī)學載藥領域，多肽、蛋白質(zhì)、DNA等生物大分子zhiliao藥物的穩(wěn)定性差和吸收率低是普遍存在的問題，因此納米囊泡載藥體系應運而生。目前人工合成的納米囊泡中，針對高分子聚合物囊泡與低分子脂質(zhì)體的研究很常見。然而，這些人工納米載藥體進入人體后，易引發(fā)自身免疫反應，從而被人體免疫系統(tǒng)qing除; 同時其靶向性差，因而載藥效率不高且具有一定的毒副作用。近年來，外泌體作為天然生物囊泡的成員之一，因具有介導細胞間信號轉(zhuǎn)導、 抗原呈遞和免疫應答等功能，兼具人工合成囊泡的小粒徑、脂溶、穩(wěn)定、高滲透性和可改造性等特點，越來越多地被應用于藥物靶向遞送，有望成為藥物遞送系統(tǒng)發(fā)展過程中的一項重要突破。
電穿孔法時外泌體載藥的方法的一種，因參數(shù)容易控制,多種藥物載入外泌體都可以使用該方法。Wang等人研究了胞外囊泡作為小RNA的靶向遞送系統(tǒng),利用電穿孔法將siRNA/microRNA載入核酸適配體AS1411(AS1411是一種靶向中流細胞高表達核仁素的核酸適配體)修飾的囊泡中,然后通過外泌體將siRNA/microRNA靶向遞送到乳腺ai組織。由于AS1411和核仁素的的結(jié)合達到瘤靶向(核仁素在乳腺ai細胞表面高表達),這種靶向let-7miRNA的囊泡可在體外傳遞到人乳腺aiMDA-MB-231細胞。靜脈注射載有Cy5熒光標記的miRNAlet-7的AS1411囊泡,可以選擇性靶向荷瘤小鼠中的中流部位,并抑制中流的生長,而且修飾的囊泡耐受性良好,沒有顯示明顯的非特異性副作用或免疫應答反應。間充質(zhì)干細胞外泌體能通過裝載miＲ-132zhiliao心肌缺血。
甲狀腺ai（thyroidcarcinoma）是一種常見的內(nèi)分泌惡性中流。在甲狀腺ai的所有亞型中，甲狀腺未分化ai（ATC）的惡性程度很高。目前ATC缺乏有效的zhiliao藥物，屬于難治性惡性中流疾病，傳統(tǒng)的放化療療效差，分子靶向藥物jin對部分基因突變型ATC有效。硬脂酞輔酶A去飽和酶1（stearoyl-CoAdesat urase1，SCD1）是一種脂肪酸合成和代謝的關鍵調(diào)節(jié)分子，也是催化飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)變的限速酶，參與細胞增殖、細胞凋亡等多種生理過程。為研究SCD1與ATC的關系，通過構(gòu)建鑒定靶向SCD-1的小干擾RNA（siRNA）外泌體，分析以外泌體為載體的靶向SCD-1的RNAi基因zhiliao對ATC細胞存活的影響。細胞存活實驗證明SCD-1-siRNA外泌體可抑制ATC細胞的存活，促進細胞凋亡。這一結(jié)果說明SCD-1-siRNA外泌體具有zhiliaoATC的巨大潛力。外泌體對基因類藥物的裝載方式一般采用電穿孔法和化學轉(zhuǎn)染法。天津動物組織樣本外泌體載藥實驗服務
外泌體載藥中外泌體提取的方法可聯(lián)合使用各種方法,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體。天津動物組織樣本外泌體載藥實驗服務
采用外泌體作為藥物載體，制備一種裝載連翹酯苷A(FTA)的外泌體遞藥系統(tǒng)。細胞攝取實驗的結(jié)果表明，A549細胞可以攝取FTA-Exos，并且能維持長時間的穩(wěn)定，延長了半衰期，明顯的提高了連翹酯苷A的生物利用度，為研究連翹酯苷A體外抗中流轉(zhuǎn)移作用打下基礎。經(jīng)典劃痕實驗結(jié)果表明，F(xiàn)TA-Exos組對于A549細胞的遷移抑制率高達90%以上，明顯高于連翹酯苷A組遷移抑制率，證實含藥外泌體具有更好的體外抑制A549細胞遷移效果。成功建立了FTA-Exos藥物遞送系統(tǒng)，制備的FTA-Exos性質(zhì)穩(wěn)定優(yōu)越，明顯提高連翹酯苷A的生物利用度，并具有更好的抑制A549細胞遷移作用。天津動物組織樣本外泌體載藥實驗服務
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