尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進(jìn)行外泌體分離的技術(shù), 樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進(jìn)入凝膠孔隙后, 需耗費(fèi)相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間通過凝膠柱, 導(dǎo)致延遲洗脫, 實(shí)現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會(huì)明顯損失外泌體, 保證產(chǎn)量的同時(shí)可有效去除雜質(zhì)蛋白, 更適合目標(biāo)蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管, 其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管, 而較大的顆粒, 如外泌體和其他囊泡, 仍留在透析管中而被收集?？刹扇⊥ㄟ^Nanosight 可視型納米顆粒分析儀確定外泌體顆粒數(shù)。吉林植物根組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)
外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu), 其穩(wěn)定性較好, 可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響, 從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前, 常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存, 但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變, 也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集, 反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定, 血漿存放于4 °C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解, 在–20 °C下長(zhǎng)期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解, 但miRNA卻十分穩(wěn)定, 這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。安徽水果外泌體分離外泌體攜帶的蛋白及RNA等物質(zhì)有成為中流標(biāo)志物的潛力，在中流早期診斷和預(yù)后判斷中的指導(dǎo)作用不容忽視。
流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM)，將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè)，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)，目前該儀器已商品化。
目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子。例如，血液外泌體miR-21的升高已被證實(shí)與胰腺ai、結(jié)直腸ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多種中流相關(guān)，可能與其參與中流xue管生成有關(guān)，研究表明肺ai細(xì)胞釋放的外泌體miR-21會(huì)通過STAT3依賴機(jī)制誘導(dǎo)周圍支氣管細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的產(chǎn)生，從而促進(jìn)血管生成。在食管ai中，miR-21還可以反映中流的惡性程度，食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升，上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。在膀胱ai患者中，尿液中的miR-21和miR-4454會(huì)明顯上調(diào)。外泌體參與細(xì)胞分化、新生血管形成、促進(jìn)血流恢復(fù)和毛xi血管網(wǎng)形成。
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測(cè)量，但兩種方法也各有不足。動(dòng)態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測(cè)量結(jié)果，因此動(dòng)態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動(dòng)態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對(duì)不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測(cè)量的顆粒粒徑范圍對(duì)儀器分別校準(zhǔn)，操作繁瑣。受檢測(cè)靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測(cè)。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。外泌體介導(dǎo)的分化在zhiliao組織損傷中發(fā)揮著重要作用。上海海洋動(dòng)物組織外泌體
外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖、再生和遷移等生理過程，在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用。吉林植物根組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)
在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中，由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸，因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞，而后將SR4987與PTX共混，使SR4987分泌的外泌體含有PTX，再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來，研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能，小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047～0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%，這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。吉林植物根組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)
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