外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。載藥外泌體對中流細胞株的抑制作用有劑量依賴性。天津組織外泌體載藥
外泌體載藥系統(tǒng)的優(yōu)勢：1首先，外泌體天然的生物學起源為細胞內(nèi)源性zhiliao因子的產(chǎn)生和裝載提供了特有的機會。此時，zhiliao藥物、寡核苷酸和納米粒子等可被送入細胞，隨后重新包裝成分泌的囊泡。利用細胞產(chǎn)生、裝載和分泌釋放載藥外泌體使zhiliao藥物裝載過程得到簡化，為特定位點（如內(nèi)腔和囊泡膜）的藥物裝載提供了基礎(chǔ)，并且還使不易裝載的物質(zhì)句有更高的吸收效率和傳遞效率。2其次，外泌體可穿透某些生物屏障如血腦屏障，到達zhiliao靶點進行給藥。3體內(nèi)某些外泌體句有很強的穩(wěn)定性，可避免被巨噬細胞吞噬和溶酶體所降解，為體內(nèi)外泌體載藥系統(tǒng)的長時間循環(huán)和長時間暴露于炎癥等刺激環(huán)境時提供保護。重慶外泌體載藥的方法裝載了連翹酯苷A(FTA)的A549來源的外泌體可以被A549細胞攝取。
普通的外泌體在體內(nèi)易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)快速qing除，難以保證載藥系統(tǒng)在到達靶部位發(fā)揮其作用前的完整性。已有相關(guān)研究證實，使用聚乙二醇衍生物對外泌體膜進行修飾，可以屏蔽網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的識別和攝取，延長其循環(huán)時間。Kooijmans等人將EGa1納米抗體連接到修飾聚乙二醇的膠束表面，利用合成膠束在不同溫度（4℃、40℃、80℃）下與外泌體孵育，使其插入到外泌體表面。研究結(jié)果表明，當孵育溫度為40℃時能較好保持外泌體膜的完整性，而且對EG-FR受體過度表達的A431細胞有較高的結(jié)合率。將同時修飾EGa1抗體和聚乙二醇的外泌體靜脈注入荷瘤小鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示，在注射60min后，血漿中仍可檢測到外泌體的存在。
中流壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(TNFrelatedapoptosisinducedligand，TＲAIL)能夠在多種中流細胞中誘導選擇性凋亡，而對正常細胞無毒性作用，已經(jīng)成為臨床前研究中有發(fā)展前景的抗中流藥物之一。Shamili等人利用非病毒載體將編碼TＲAIL-GFP的質(zhì)粒載入間充質(zhì)干細胞（MSCs）。研究結(jié)果表明，MSCs衍生的負載TＲAIL的外泌體(Exo TＲAIL)通過促使ai細胞大量壞死抑制黑色素瘤進展，并且其抗中流活性呈現(xiàn)劑量依賴性。間充質(zhì)干細胞外泌體（MSC-Exo）還能夠通過遞送內(nèi)源性或者外源性的miＲNA或蛋白質(zhì)，zhiliao其他多種中流。人臍帶血來源的間充質(zhì)干細胞作為白介素21基因傳遞載體，可用于裸鼠的上皮性卵巢aizhiliao。
靜脈注射修飾RVG神經(jīng)元靶向肽的外泌體能透過血腦屏障，用于阿爾茨海默癥的zhiliao。Alaarez-Erviti等通過基因工程技術(shù)使DC細胞分泌的外泌體膜上連接一個特異性RVG神經(jīng)元靶向肽，從而使包載siRNA的外泌體順利地靶向到腦中特定的神經(jīng)細胞。研究結(jié)果顯示，負載siRNA的RVG-EXOs可以使阿爾茨海默癥相關(guān)BACE1mRNA下調(diào)61％，蛋白表達下調(diào)62％，明顯降低β－淀粉樣肽1-42水平。之后，COOper等利用相同的技術(shù)遞送α－突觸核dan白siRNA到轉(zhuǎn)基因模型鼠中，致使大鼠中腦、紋狀體、皮質(zhì)層區(qū)域mRNA水平分別下調(diào)49％、56％、50％，相應(yīng)的α－突觸核dan白水平下調(diào)32％、26％、30％，而且能有效地抑制中腦區(qū)域α－突觸核dan白的聚集，展示了外泌體用于腦部疾病zhiliao的巨大潛力。在中風大鼠中，裝載豐富miＲ-133b的間充質(zhì)干細胞外泌體能促進星形膠質(zhì)細胞釋放外泌體。江西細胞外泌體載藥大概費用
外泌體載藥系統(tǒng)在ai癥、腦梗死和神經(jīng)退行性疾病等各種疾病模型的研究中顯示出理想的zhiliao效果。天津組織外泌體載藥
外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關(guān)注的焦點。將連接G11靶向肽的外泌體（G11-EXOs）用于遞送中流抑制性miRNA到高表達EGFR的乳腺ai組織中。研究人員將DiR標記的G11-EXOs和未經(jīng)修飾的外泌體尾靜脈注射入荷瘤小鼠體內(nèi)24h后，通過huo體成像觀察G11-EXOs組在中流部位的熒光強度是未連接靶向肽外泌體組熒光強度的3倍，說明G11-EXOs在體內(nèi)句有良好的靶向效果。隨后，研究人員將let-7amiRNA包載到G11－EXOs中并靜脈注射到小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)它能準確定位到中流組織，明顯抑制中流的生長。天津組織外泌體載藥
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