四川外泌體載藥的方法

來源: 發(fā)布時間:2022-09-18

外泌體載藥系統(tǒng)中外泌體提取的方法有很多種,有差速超高速離心法、超濾法、試劑盒提取方法、磁珠免疫法等,但單一外泌體分離方法都有其不可解決的弊端,而聯(lián)合不同的分離方法可得到更純凈、更豐富的外泌體。在裝載連翹酯苷A(FTA)的外泌體遞藥系統(tǒng)的功效中的研究中,采用了差速離心法和超濾法提取外泌體,先使用超濾管濃縮細胞上清液,富集外泌體,再使用超高速離心提取外泌體,縮減了離心次數(shù)和時間,提高了外泌體提取效率,且整個過程簡單易操作。同時采用低溫超聲孵育的方法制備FTA-Exos遞藥系統(tǒng)。外泌體成分復雜,未裝載藥物的外泌體可能促進供體中流細胞的增殖。四川外泌體載藥的方法

小分子siRNA、miRNA常作為基因zhiliao的核酸藥物,但其穩(wěn)定性差,極易被體內(nèi)的酶降解,限制了它在臨床中的運用。而外泌體的脂質雙分子層結構可以保護基因類藥物,避免其降解。其次,外泌體能通過膜融合的方式直接將包載的基因類藥物釋放到受體細胞中,實現(xiàn)更高的投遞效率。許多研究證明外泌體能成功遞送小分子siRNA、miRNA。通過體外實驗證明,來源于血漿的外泌體可以有效地傳遞siRNA到單核細胞和淋巴細胞,使MAKP1基因沉默。利用類似的方法遞送RAD51- siRNA和RAD52-siRNA到HELA細胞和纖維素肉瘤細胞中從而誘導兩個基因的沉默,研究證明RAD51基因的沉默可以造成中流細胞大量的凋亡,因而通過外泌體負載siRNA用于中流疾病方面的zhiliao句有廣闊的前景。上海組織外泌體載藥實驗參考價格裝載紫杉醇的外泌體靶向給藥系統(tǒng)通過微流控技術純化后可用于抗中流zhiliao。

外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關注的焦點。將連接G11靶向肽的外泌體(G11-EXOs)用于遞送中流抑制性miRNA到高表達EGFR的乳腺ai組織中。研究人員將DiR標記的G11-EXOs和未經(jīng)修飾的外泌體尾靜脈注射入荷瘤小鼠體內(nèi)24h后,通過huo體成像觀察G11-EXOs組在中流部位的熒光強度是未連接靶向肽外泌體組熒光強度的3倍,說明G11-EXOs在體內(nèi)句有良好的靶向效果。隨后,研究人員將let-7amiRNA包載到G11-EXOs中并靜脈注射到小鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)它能準確定位到中流組織,明顯抑制中流的生長。

天然來源的外泌體含有眾多內(nèi)源性脂質、蛋白及核酸類物質,其自身具有一定的成藥潛力,例如間充質干細胞來源的外泌體在組織修復領域獲得了巨大成功。當外泌體用作遞送載體時,一般還需人為裝載藥物。理想的載yao方法不僅要實現(xiàn)較高的載藥效率,還應保留外泌體和藥物的功能和完整性。目前,在不破壞外泌體膜完整性的情況下將藥物有效載入到外泌體中仍是一個巨大挑戰(zhàn)?,F(xiàn)有的載yao方法可分為分泌前載藥法和分泌后載藥法。分泌前載藥法通常將親代細胞與藥物共孵育(一般需要加轉染試劑),使藥物進入細胞質,細胞質中的藥物通過主動或被動的方式被分選到外泌體中,然后通過合適的提取方法即可獲得載藥的外泌體。分泌后載yao方法是目前常用的外泌體載藥策略,通常需要先分離提純外泌體,再將藥物載入其中。外泌體具有對自身中流的靶向能力,作為載體傳遞藥物可以增加中流部位的藥物濃度。

傳統(tǒng)的藥物遞送系統(tǒng)(如脂質體、合成納米粒)jin能起到簡單的藥物遞送作用,而外泌體不jin可以傳遞藥物到受體細胞,并且它自身攜帶的mRNA、蛋白類等物質具有生理活性,因此在未來的研究中可以選擇不同細胞來源的外泌體作為藥物載體,對疾病進行更有效的zhiliao。除了通過細胞產(chǎn)生需要的不同類型外泌體,近年來對于仿生外泌體的研究也引起了人們廣fan的興趣。設計了一種通過離心懸浮細胞制備類似外泌體納米囊泡的裝置,這種裝置制備的納米囊泡產(chǎn)量比外泌體高250倍。因此,依靠仿生外泌體代替外泌體可以有效地解決外泌體載藥量低、分離純化耗時耗力、產(chǎn)量不足等問題,但它仍處于初步研究階段。藥物載入到外泌體中的方式可分為兩種,即外源性載yao方式和內(nèi)源性載yao方式。江西整體項目外泌體載藥實驗價格比較

HA修飾的牛奶外泌體載藥體系可將藥物靶向遞送至CD44高表達的中流細胞中,提高對Dox的攝取效率。四川外泌體載藥的方法

mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運輸。利用多泡體(含外泌體)負載mRNA/蛋白進行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質體2000或病毒載體對HEK-293細胞進行轉染,使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP,其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPRT:尿嘧啶磷酸核糖轉移酶;EGFP:增強型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處,并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC),神經(jīng)鞘瘤的增長被明顯抑制。這主要是由于CD和UPRT可以將5-FC轉化為5氟尿嘧啶脫氧核苷酸(5-FdUMP),而后者又是胸甘酸合成酶的抑制劑,可以抑制脫氧胸甘酸的合成,從而起到抑制DNA的合成以及促進中流細胞凋亡的效果。Saydam等的研究表明多泡體/外泌體不jin可以有效輸送mRNA/蛋白質,并且句有與其他抗ai藥物聯(lián)合zhiliao中流的潛力。四川外泌體載藥的方法

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