外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個(gè)關(guān)鍵的檢查點(diǎn)：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和細(xì)胞膜的融合，這三個(gè)檢查點(diǎn)都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運(yùn)輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面，通過招募效應(yīng)因子來調(diào)節(jié)相應(yīng)膜結(jié)構(gòu)的囊泡運(yùn)輸，例如，在內(nèi)體溶酶體運(yùn)輸網(wǎng)絡(luò)中，RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合；內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變；RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs；RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細(xì)胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白，特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體，定位到內(nèi)體和MVEs，通過MVEs和溶酶體融合來進(jìn)入溶酶體降解，此過程受多種RABGTPases和ESCRT復(fù)合體的調(diào)控。外泌體的形成涉及到原生質(zhì)膜的雙重內(nèi)陷和含有腔內(nèi)小泡（ILVS）的細(xì)胞內(nèi)多泡體（MVBS）的形成。血漿外泌體iTRAQ
外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對如何準(zhǔn)確及高純度提取外泌體, 并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分, 并在100 000 ×g~200 000 ×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認(rèn)為是外泌體分離的“金標(biāo)準(zhǔn)”, 也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結(jié)合0.22 μm或0.45 μm孔徑濾膜進(jìn)行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集, 其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。體液外泌體NTA隨著EV研究倍受世界矚目，各國啟動(dòng)了大型研究項(xiàng)目。
circZKSCAN1在肝ai細(xì)胞中低表達(dá)且抑制肝ai細(xì)胞的增殖，ciRS-7則被認(rèn)為是非小細(xì)胞肺ai、結(jié)腸ai和胃ai等中流的預(yù)后指標(biāo)，其高表達(dá)與較高的臨床分期和較差的總體生存期相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)組織、血液和外泌體中的circRNA分子表達(dá)失調(diào)，而多種circRNA的聯(lián)合檢測會(huì)提高外泌體標(biāo)志物的敏感性和特異性，甚至可達(dá)到90％左右。外泌體可作為納米載體來介導(dǎo)細(xì)胞間的信息傳遞，發(fā)揮信息傳遞作用的方式主要有：在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移受體，通過配體受體介導(dǎo)的方式作用于受體細(xì)胞，向受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能蛋白，通過膜融合方式向受體細(xì)胞傳遞mRNA、miRNAs或轉(zhuǎn)錄因子等信息。這些方式為中流靶向zhiliao開辟了新的途徑。
在Rameshwar等的研究中，采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，使外泌體載有anti-miR-9。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miR-9傳遞的實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不僅可以通過縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實(shí)現(xiàn)，而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9，顯示出外泌體在運(yùn)載miRNA進(jìn)行基因zhiliao時(shí)的潛力。利用外泌體進(jìn)行GBM的zhiliao不只停留在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上，也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報(bào)道。健康母乳來源的外泌體含與免疫功能相關(guān)的miRNA，能在體外增強(qiáng)外周血來源的T調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)量，調(diào)節(jié)免疫耐受。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200 nm，形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70—90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關(guān)。microRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá)。microRNA在物種進(jìn)化中相當(dāng)保守，在動(dòng)物、植物等中發(fā)現(xiàn)的microRNA表達(dá)均有嚴(yán)格的組織特異性和時(shí)序性。microRNA在細(xì)胞生長和發(fā)育過程中起多種作用，包括調(diào)控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。miRNA是中流外泌體檢測中較常見的標(biāo)志物。山東外泌體lncRNA芯片
CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有免疫調(diào)節(jié)的作用。血漿外泌體iTRAQ
血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定, 將血清在4 °C短期保存期間即發(fā)生降解, 這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80 °C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境, 雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4 °C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失, 但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80 °C環(huán)境下, 但在處理或運(yùn)輸過程中有時(shí)很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體, 在冷凍過程中使用海藻糖作為保護(hù)劑, 海藻糖可以提供生物保護(hù)作用, 如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體; 減少冷凍過程中冰的形成; 防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集; 減少分離和保存過程中細(xì)胞外囊泡的損失等。血漿外泌體iTRAQ
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