湖南單熒光自噬慢病毒

來源: 發(fā)布時間:2022-08-07

自噬過程的調(diào)控:自噬這一過程一旦啟動,必須在度過危機后適時停止,否則,其非特異性捕獲胞漿成分的特性將導致細胞發(fā)生不可逆的損傷。這也提醒我們在研究自噬時一定要動態(tài)觀察,任何橫斷面的研究結果都不足以評價自噬的活性。目前,已經(jīng)報告了許多因素能誘導細胞發(fā)生自噬,如饑餓、生長因子缺乏、微生物傳染、細胞器損傷、蛋白質(zhì)折疊錯誤或聚集、DNA損傷、放療、化療等等,這么多刺激信號如何傳遞的、哪些自噬蛋白接受信號、又有哪些自噬蛋白去執(zhí)行等許多問題都還在等待進一步解答中。關于傳遞自噬信號的通路目前比較肯定的有:阻止類ClassIPI3Kpathway(PI-phosphatidylinositol,磷脂酰肌醇)與IRS(Insulinreceptorsubstrate)結合,接受胰島素受體傳來的信號(血糖水平高阻止自噬)。APP是Aβ的前體蛋白, 形態(tài)學和功能研究均已證實APP是自噬性降解的底物。湖南單熒光自噬慢病毒

自噬已被證明與許多疾病的發(fā)生和進展密切相關,這些疾病包括神經(jīng)退行性疾?。ㄅ两鹕?,阿爾茨海默病等)、病癥、自身免疫病等。常見的自噬過程包括巨自噬、微自噬和分子伴侶介導的自噬。巨自噬又可以進一步細分為非選擇性自噬和選擇性自噬。選擇性自噬是細胞器的自噬,如線粒體自噬、過氧化物酶體自噬、脂質(zhì)自噬、葉綠體自噬、核糖體自噬等。巨自噬是細胞清理受損細胞器和無用蛋白的主要途徑。在這一過程中,細胞接受自噬誘導信號后,在細胞質(zhì)中首先形成一個個小的類似雙層脂質(zhì)體的吞噬泡,然后吞噬泡不斷延伸,并將受損細胞器或蛋白包裹起來,形成自噬體。自噬體在細胞質(zhì)中被轉(zhuǎn)運至溶酶體并較終與溶酶體融合,在溶酶體的酸性環(huán)境中,自噬體里的物質(zhì)被各種酶降解。河南透射電鏡檢測自噬自噬信號通路受到嚴密調(diào)控,在基礎水平上起到重要管家作用,可使細胞在多種應力條件下繼續(xù)存活。

自噬(Autophagy),或稱自體吞噬,是一個涉及到細胞自身結構通過溶酶體機制而被分解的過程,該過程是一個受到緊密調(diào)控的步驟,幫助細胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來的循環(huán)中保持一個平衡狀態(tài)。細胞接受自噬誘導信號后,在胞漿的某處形成一個扁平的類似“脂質(zhì)體”樣的膜結構,稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸,將胞漿中的細胞器等成分,全部包裹住成為密閉的結構,稱為“自噬體(autophagosome)”。自噬體形成后,可與溶酶體融合,自噬體中的內(nèi)容物隨即被降解,產(chǎn)物(氨基酸、脂肪酸等)被輸送到胞漿中,供細胞重新利用,而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。

細胞經(jīng)誘導或阻止后,需對自噬過程進行觀察和檢測,常用的策略和技術有:1、利用WesternBlot檢測LC3-II/I比值的變化以評價自噬形成自噬形成時,胞漿型LC3(即LC3-I)會酶解掉一小段多肽,轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。(注意:LC3抗體對LC3-II有更高的親和力,會造成假陽性。方法2和3需結合使用,同時需考慮溶酶體活性的影響。)2、檢測長壽蛋白的批量降解:非特異。3、MDC(Monodansylcadaverine,單丹磺酰尸胺)染色:包括自噬體,所有酸性液泡都被染色,故屬于非特異性的。4、CellTrackerTMGreen染色:主要用于雙染色,但其能染所有的液泡,故也是屬于非特異性的。細胞自噬是真核生物中進化保守的對細胞內(nèi)物質(zhì)進行周轉(zhuǎn)的重要過程。

對抗關系中,自噬與凋亡的目標及過程背道而馳。自噬并不引發(fā)細胞死亡,相反促進細胞存活。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激中,自噬通過消化蛋白聚集物和錯誤折疊蛋白維護內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能,限制了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應誘發(fā)的細胞凋亡。在細胞能量危機的時候,自噬還通過消化細胞器和蛋白質(zhì)等大分子為細胞提供能量和營養(yǎng),延長細胞壽命。因而在成年小鼠的饑餓期、乳鼠出生后的喂養(yǎng)適應期以及營養(yǎng)剝奪的細胞中,均顯示出自噬為細胞存活所必需。在細胞遭受代謝應激、藥物調(diào)整和放射性損傷時,自噬也是維護基因完整性的重要機制。因此,在乳腺病、前列腺病及結腸病細胞中阻止自噬,能夠提高病變細胞對放化療的敏感性。線粒體自噬是自噬的一種,它能通過清理去極化線粒體減少活性氧簇,達到細胞保護的目的。線粒體自噬甚至可通過減少線粒體外膜通透化和減少細胞色素C和SMAC/DIABLO等線粒體促凋亡蛋白的釋放阻止凋亡發(fā)生。大自噬,也就是通常說的自噬,是真核細胞蛋白降解的途徑之一。白藜蘆醇通過誘導自噬途徑抑制PrP(106~126)介導的神經(jīng)SH-SY5Y細胞凋亡和線粒體功能障礙。廣州雙熒光自噬

分子伴侶介導的自噬:胞質(zhì)內(nèi)蛋白結合到分子伴侶后被轉(zhuǎn)運到溶酶體腔中,然后被溶酶體酶消化。湖南單熒光自噬慢病毒

自噬是一個吞噬自身細胞質(zhì)蛋白或細胞器并使其包被進入囊泡,并與溶酶體融合形成自噬溶酶體,降解其所包裹的內(nèi)容物的過程,借此實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬在機體的生理和病理過程中都能見到,其所起的作用是正面還是負面的尚未完全闡明,對病變的研究尤其如此,值得關注。自噬(autophagy)是由Ashford和Porter在1962年發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)有“自己吃自己”的現(xiàn)象后提出的,是指從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的無核糖體附著區(qū)脫落的雙層膜包裹部分胞質(zhì)和細胞內(nèi)需降解的細胞器、蛋白質(zhì)等成分形成自噬體(autophagosome),并與溶酶體融合形成自噬溶酶體,降解其所包裹的內(nèi)容物,以實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。湖南單熒光自噬慢病毒