在用GFP-LC3B慢病毒ganran細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來(lái)(LC3B dots or punctae)。RFP-GFP-LC3B是研載生物研發(fā)的重組慢病毒，ganran后能夠在靶細(xì)胞中有效表達(dá)紅色熒光蛋白(RFP)、綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的紅色和綠色熒光，可以用于細(xì)胞自噬的檢測(cè)。自噬小體在與溶酶體融合過(guò)程中，溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境會(huì)導(dǎo)致GFP熒光淬滅，這為追蹤GFP-LC3B的細(xì)胞定位增加了難度。自噬可以清理掉磨損的細(xì)胞，并進(jìn)行更換，從而使細(xì)胞衰老的時(shí)間延長(zhǎng)。西安自噬
自噬是一種通過(guò)溶酶體在細(xì)胞內(nèi)部降解功能失調(diào)的細(xì)胞組分的過(guò)程。自噬可以降解和消化受損、變性的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)與核酸等生物大分子。為細(xì)胞的再生和修復(fù)提供原料，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的循環(huán)利用。自噬屬動(dòng)態(tài)過(guò)程。在基礎(chǔ)條件下，各類細(xì)胞中均存在低水平自噬。但營(yíng)養(yǎng)不足或缺氧等刺激可能導(dǎo)致自噬水平上調(diào)。自噬是普遍存在于真核細(xì)胞的現(xiàn)象，并且可分為巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬三大類。這是一個(gè)受到緊密調(diào)控的步驟，此步驟是細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育與穩(wěn)態(tài)中的常規(guī)步驟，幫助細(xì)胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來(lái)的循環(huán)中保持一個(gè)平衡狀態(tài)。目前已有多份研究表明自噬在許多細(xì)胞的分化進(jìn)程中被不同程度地喚醒，例如參與血管生成、成骨分化、脂肪生成、神經(jīng)發(fā)生等過(guò)程。正常細(xì)胞自噬增強(qiáng)，可表現(xiàn)出阻止腫細(xì)胞發(fā)生的功能。西安自噬自噬紊亂可能在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化等其他自身免疫病的發(fā)生中起到一定作用。
在心力衰竭早期，線粒體自噬往往被抑制，此時(shí)如果適當(dāng)提高線粒體自噬水平，可以延緩心力衰竭的進(jìn)展;而在心力衰竭晚期，線粒體自噬往往被過(guò)度激huo，導(dǎo)致心肌細(xì)胞功能障礙，心力衰竭加重，此時(shí)應(yīng)適當(dāng)抑制線粒體自噬水平。Milonas等研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭患者的心肌細(xì)胞中Beclin-1和LC3表達(dá)增加，而隨著心臟負(fù)荷減輕，Beclin-1和LC3表達(dá)亦隨之降低，提示線粒體自噬與心力衰竭有關(guān)。Givvimani等在構(gòu)建壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心力衰竭模型的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著線粒體自噬水平異常增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡也異常增加。
在正常情況或短時(shí)間的饑餓狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)主要通過(guò)泛素化蛋白酶系統(tǒng)降解為氨基酸。但數(shù)小時(shí)以上的饑餓后，自噬被活化并將蛋白質(zhì)降解為氨基酸。關(guān)于這些氨基酸的用途，主要有三種途徑：自噬的另一大功能是清理細(xì)胞內(nèi)受損的細(xì)胞器或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)。有時(shí)候自噬也會(huì)清理一些多余的細(xì)胞器（如過(guò)氧化物酶體）。自噬在清理垃圾方面的功能使自噬成為許多疾病的潛在調(diào)整靶點(diǎn)。已經(jīng)有研究表明，自噬被阻止會(huì)導(dǎo)致不正常的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器在肝臟、神經(jīng)細(xì)胞和肌肉細(xì)胞中累積。例如，在阿爾茨海默癥中，可以觀察到大量的自噬體，這可能與該疾病中累積的淀粉樣蛋白變性有關(guān)。而在一些神經(jīng)退行性變（如帕金森癥、亨廷頓氏舞蹈癥）的動(dòng)物模型中，用TOR激酶阻止劑來(lái)模擬饑餓信號(hào)以增強(qiáng)自噬，可以減少致病的α-突觸核的蛋白積累，并延緩癥狀出現(xiàn)。由于自噬體膜形成過(guò)程中需要LC3，因此通過(guò)標(biāo)記LC3可以識(shí)別自噬體。
有學(xué)者考察了三氧化2砷（ATO）對(duì)體內(nèi)和體外膠質(zhì)瘤細(xì)胞U118-MG的作用，研究發(fā)現(xiàn)ATO可通過(guò)下調(diào)中流組織中存活素的量誘導(dǎo)U118-MG細(xì)胞自噬和凋亡，從而發(fā)揮抑制中流的作用，其作用抑制與PI3K/Akt通路和激huoMAPK通路相關(guān)。DHA還可誘導(dǎo)食管aiEca109和Ec9706細(xì)胞LC3-I向LC3-II轉(zhuǎn)變，并且發(fā)生細(xì)胞凋亡。和厚樸酚可劑量依賴性抑制多形性膠質(zhì)母細(xì)胞DBTRG-05MG細(xì)胞活力，誘導(dǎo)DBTRG-05MG細(xì)胞自噬和凋亡。槲皮素誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U373-MG發(fā)生線粒體介導(dǎo)的自噬，誘導(dǎo)LC3-I向LC3-II轉(zhuǎn)化。另外，漢黃芩黃素通過(guò)抑制mTOR/P70S6K通路誘導(dǎo)人鼻咽ai自噬，且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。自噬體與溶酶體融合，成為自溶體，一些被隔離的貨物被降解，然后回收以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。杭州細(xì)胞自噬慢病毒包裝
槲皮素、漢黃芩苷等可誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，而β-細(xì)辛醚、丹酚酸B、人參皂苷Rg1則具有抑制細(xì)胞自噬的作用。西安自噬
自噬阻止劑可以通過(guò)阻止自噬通路中的某種蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)阻止自噬，也可以通過(guò)直接擾亂溶酶體功能來(lái)阻止自噬，因?yàn)槿苊阁w是自噬完成的關(guān)鍵場(chǎng)所。氯喹和羥氯喹是兩種臨床中常用的藥物，較早它們被用于調(diào)整瘧疾，后來(lái)又發(fā)現(xiàn)其對(duì)SLE等病有效，它們都是通過(guò)降低溶酶體酸性、擾亂溶酶體功能來(lái)阻止自噬的。這些分子現(xiàn)在也在臨床實(shí)驗(yàn)中與化療藥物聯(lián)用以降低耐藥性。解決特異性不足的一個(gè)未來(lái)的研究方向，是針對(duì)特異性更高的靶點(diǎn)（即該蛋白只存在于自噬通路中）開(kāi)發(fā)阻止劑/激動(dòng)劑。另外，針對(duì)系統(tǒng)性的脫靶效應(yīng)，可以通過(guò)靶向遞送的方式將脫靶效應(yīng)降至較低，例如將自噬阻止劑與化療藥物連接在同一個(gè)靶向到病變的藥物載體上，使其只影響病變中的自噬水平而不干擾免疫系統(tǒng)。在自噬過(guò)程中，通過(guò)壓力誘導(dǎo)自噬后，細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)被自噬體的雙膜結(jié)構(gòu)隔離。西安自噬