GFP-LC3病毒系統(tǒng)可高效ganran目的細胞，表達GFP-LC3，ganranganran后細胞可在熒光顯微鏡下實時觀察自噬的整體水平；由于電鏡耗時長，不利于監(jiān)測自噬形成。我們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了GFP-LC3指示技術(shù)：無自噬時，GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點，一個斑點相當(dāng)于一個自噬體，可以通過計數(shù)來評價自噬活性的高低。研載生物已開發(fā)出高效的評價用GFP-LC3病毒載體，通過瞬時高效ganran細胞，配合活細胞工作站成功評價自噬流。在用GFP-LC3B慢病毒感染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細胞質(zhì)中；黑龍江自噬透射電鏡
雖然自噬促進劑和自噬阻止劑在臨床應(yīng)用中有廣闊的前景，但許多分子存在特異性不足的問題，限制了它們的實際應(yīng)用。例如，mTOR作為細胞中的一個重要的能量感受器，調(diào)控自噬只是其下游眾多信號通路中的一個，故而，旨在改變自噬水平的mTOR阻止劑/激動劑，存在許多可能不利于總體療效的副作用，這限制了雷帕霉素在調(diào)整神經(jīng)退行性疾病中的應(yīng)用。又例如，氯喹或羥氯喹可以通過擾亂溶酶體功能阻止自噬，增強化療藥物的作用，但其免疫阻止作用有可能不利于總體的抗病效果。自噬并不引發(fā)細胞死亡，相反促進細胞存活。江蘇自噬透射電鏡發(fā)生傳染時，可通過自噬調(diào)控炎癥、抗原及微生物捕捉與降解。
根據(jù)細胞物質(zhì)運到溶酶體內(nèi)的途徑不同，自噬分為以下幾種。①大自噬：由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體或細胞質(zhì)膜等來源的膜包繞待降解物形成自噬體，然后與溶酶體融合并降解其內(nèi)容物；②小自噬：溶酶體的膜直接包裹長壽命蛋白等，并在溶酶體內(nèi)降解；③分子伴侶介導(dǎo)的自噬（chaperonemediatedautophagy,CMA）：胞質(zhì)內(nèi)蛋白結(jié)合到分子伴侶后被轉(zhuǎn)運到溶酶體腔中，然后被溶酶體酶消化。CMA的底物是可溶的蛋白質(zhì)分子，在清理蛋白質(zhì)時有選擇性，而前兩者無明顯的選擇性。
自噬是一個吞噬自身細胞質(zhì)蛋白或細胞器并使其包被進入囊泡，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物的過程，借此實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬在機體的生理和病理過程中都能見到，其所起的作用是正面還是負面的尚未完全闡明，值得關(guān)注。自噬是指從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的無核糖體附著區(qū)脫落的雙層膜包裹部分胞質(zhì)和細胞內(nèi)需降解的細胞器、蛋白質(zhì)等成分形成自噬體（autophagosome），并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物，以實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬體與溶酶體融合，成為自溶體，一些被隔離的貨物被降解，然后回收以維持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。
有學(xué)者考察了三氧化2砷（ATO）對體內(nèi)和體外膠質(zhì)瘤細胞U118-MG的作用，研究發(fā)現(xiàn)ATO可通過下調(diào)中流組織中存活素的量誘導(dǎo)U118-MG細胞自噬和凋亡，從而發(fā)揮抑制中流的作用，其作用抑制與PI3K/Akt通路和激huoMAPK通路相關(guān)。DHA還可誘導(dǎo)食管aiEca109和Ec9706細胞LC3-I向LC3-II轉(zhuǎn)變，并且發(fā)生細胞凋亡。和厚樸酚可劑量依賴性抑制多形性膠質(zhì)母細胞DBTRG-05MG細胞活力，誘導(dǎo)DBTRG-05MG細胞自噬和凋亡。槲皮素誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株U373-MG發(fā)生線粒體介導(dǎo)的自噬，誘導(dǎo)LC3-I向LC3-II轉(zhuǎn)化。另外，漢黃芩黃素通過抑制mTOR/P70S6K通路誘導(dǎo)人鼻咽ai自噬，且誘導(dǎo)細胞凋亡。白藜蘆醇通過誘導(dǎo)自噬途徑抑制PrP（106～126）介導(dǎo)的神經(jīng)SH-SY5Y細胞凋亡和線粒體功能障礙。西安細胞自噬電鏡檢測
誘導(dǎo)與吞噬泡形成：為應(yīng)對多種刺激，通過形成一種獨特的平整細胞膜（吞噬泡）誘導(dǎo)自噬。黑龍江自噬透射電鏡
選擇性自噬是真核生物體內(nèi)清理蛋白、受損細胞器和外源微生物的基礎(chǔ)生理過程。而蛋白的翻譯后修飾，特別是泛素化修飾能夠作為選擇性自噬中的底物識別的重要信號。崔雋教授課題組發(fā)現(xiàn)選擇性自噬參與調(diào)控非經(jīng)典NF-kB信號通路的重要過程。選擇性自噬中的貨物受體p62通過識別p52/p100的N端上的K63泛素化鏈進而促使p52/p100發(fā)生自噬降解，阻止非經(jīng)典NF-kB信號通路。有趣的是，已有報道認(rèn)為p100C端的K48泛素化鏈?zhǔn)堑鞍酌阁w降解信號。K63泛素化鏈修飾并非大家所熟知的蛋白降解信號，但卻能被自噬貨物受體p62識別并介導(dǎo)蛋白降解，進而調(diào)控底物功能，影響生理與疾病進程。相同的細胞在不同的外部因素作用時，自噬的作用可能不同。黑龍江自噬透射電鏡