與PC-3細(xì)胞相比,PC-3細(xì)胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等,而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來(lái)源細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關(guān),包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細(xì)胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外,外泌體中還攜帶有來(lái)源細(xì)胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。實(shí)際上,用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。腹水外泌體miRNA芯片
流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低,所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射,操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM),將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm,能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè),并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),目前該儀器已商品化。上海細(xì)胞外泌體WB干細(xì)胞外泌體具有減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管生成等功能。
與正常細(xì)胞相比,中流細(xì)胞外泌體的分泌量增多,內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結(jié)構(gòu)的保護(hù),中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細(xì)胞來(lái)源的活性生物分子,其特點(diǎn)包括:(1)提供具有穩(wěn)定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運(yùn)輸至遠(yuǎn)端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠與靶細(xì)胞之間進(jìn)行更有效的信息交流。外泌體介導(dǎo)中流轉(zhuǎn)移:體外研究和體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)表明惡性中流細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠(yuǎn)端中流中惡性程度較低的ai細(xì)胞攝入,其內(nèi)所包含的與轉(zhuǎn)移相關(guān)的mRNAs進(jìn)入轉(zhuǎn)移性較低的細(xì)胞后,能夠增強(qiáng)其轉(zhuǎn)移能力。
雖然系統(tǒng)遞送的外泌體主要在肝臟、腎臟和脾臟中積累,但通過在外泌體的外表面上展示特定的靶向分子。例如,識(shí)別靶抗原的肽或抗體片段,可以獲得靶向外泌體;通過在細(xì)胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定的納米抗體,可以使細(xì)胞分泌囊泡顯示多種蛋白,包括抗體、熒光蛋白和信號(hào)分子。自然分泌的外泌體分離純化直接作為藥物的潛力有限,但是,將自然的外泌體分泌所需組分摻入合成脂質(zhì)體或納米顆粒中,并且使用可控程序組裝后的工程化外泌體模擬物在藥學(xué)上擁有更大的應(yīng)用潛力。在胚胎種植方面,胚胎來(lái)源的外泌體攜帶調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜局部免疫系統(tǒng)的物質(zhì),在胚胎種植中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進(jìn)行外泌體分離的技術(shù), 樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進(jìn)入凝膠孔隙后, 需耗費(fèi)相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間通過凝膠柱, 導(dǎo)致延遲洗脫, 實(shí)現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會(huì)明顯損失外泌體, 保證產(chǎn)量的同時(shí)可有效去除雜質(zhì)蛋白, 更適合目標(biāo)蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管, 其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管, 而較大的顆粒, 如外泌體和其他囊泡, 仍留在透析管中而被收集。中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體能促進(jìn)中流的轉(zhuǎn)移。組織外泌體鑒定
外泌體能夠影響級(jí)聯(lián)反應(yīng)的每一步,因此可作為病灶治理的靶點(diǎn)。腹水外泌體miRNA芯片
我國(guó)經(jīng)濟(jì)進(jìn)入“新常態(tài)”,總體上推動(dòng)外泌體實(shí)驗(yàn),細(xì)胞自噬實(shí)驗(yàn), 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),鐵死亡實(shí)驗(yàn)從粗放式增長(zhǎng)向注重質(zhì)量、效率方向轉(zhuǎn)變。民間資本的進(jìn)入也一定程度刺激我國(guó)外泌體實(shí)驗(yàn),細(xì)胞自噬實(shí)驗(yàn), 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),鐵死亡實(shí)驗(yàn)市場(chǎng)活力。社會(huì)對(duì)健康類產(chǎn)業(yè)的關(guān)注度越來(lái)越高,迫切需要對(duì)外泌體實(shí)驗(yàn),細(xì)胞自噬實(shí)驗(yàn), 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),鐵死亡實(shí)驗(yàn)的規(guī)模和結(jié)構(gòu)進(jìn)行核算。監(jiān)管體系缺失,山東的疫苗事件中,體現(xiàn)出銷往24個(gè)省市的疫苗各方面監(jiān)管力度小。制藥企業(yè)和各大醫(yī)藥機(jī)構(gòu)由不同部門管理,這種分段監(jiān)管方式存在很大的醫(yī)藥健康漏洞。服務(wù)型項(xiàng)目新市場(chǎng)加入通常耗資巨大,單一的資本進(jìn)入往往會(huì)形成極大的資本壓力,因此一些重大的服務(wù)型項(xiàng)目往往都會(huì)通過數(shù)家有實(shí)力的資本進(jìn)行組合資本。美國(guó)銷售產(chǎn)業(yè)與中國(guó)有所不同,和美國(guó)相比,中國(guó)的產(chǎn)業(yè)仍處于初創(chuàng)期。在經(jīng)濟(jì)新常態(tài)下,中國(guó)大銷售產(chǎn)業(yè)憑借獨(dú)特資源和市場(chǎng)優(yōu)勢(shì),一舉成為資本角逐的重點(diǎn)領(lǐng)域之一。有關(guān)機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè),中國(guó)銷售產(chǎn)業(yè)規(guī)模未來(lái)5年年均復(fù)合增長(zhǎng)率約為27.26%。腹水外泌體miRNA芯片