外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子，已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來(lái)分離外泌體。目前,市場(chǎng)已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見(jiàn)的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡(jiǎn)單不需要特殊的儀器,但是價(jià)格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過(guò)夜,之后再低速離心。即可進(jìn)行外泌體的提取，此方法實(shí)行起來(lái)較為簡(jiǎn)單。外泌體載阿霉素可以部分限制阿霉素穿過(guò)心血管內(nèi)皮細(xì)胞,減少阿霉素在心臟部位的聚集,降低心臟毒性。河南細(xì)胞外泌體載藥實(shí)驗(yàn)大概費(fèi)用
miＲNA的運(yùn)載也存在著種種挑戰(zhàn):miＲNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來(lái)越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運(yùn)載miＲNA的優(yōu)良載體，并且利用外泌體運(yùn)輸miＲNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，使外泌體載有anti-miＲ-9。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miＲ-9傳遞的實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不jin可以通過(guò)縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過(guò)外泌體傳遞anti-miＲ-9。且anti-miＲ-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對(duì)中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miＲ-9實(shí)現(xiàn)，而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miＲ-9，顯示出外泌體在運(yùn)載miＲNA進(jìn)行基因zhiliao時(shí)的潛力。組織外泌體載藥實(shí)驗(yàn)服務(wù)外泌體載yao方法-共孵育方法適用于親脂類藥物。
姜黃素／外泌體可以明顯地減少由脂多糖引起的炎癥因子IL-6（白介素-6）和TNF-a（中流壞死因子－α）的釋放。在脂多糖引起的炎癥模型中，注射姜黃素／外泌體的小鼠組幾乎未發(fā)生死亡，而注射游離姜黃素藥物的小鼠組死亡率接近60％，注射姜黃素／脂質(zhì)體的小鼠組死亡率接近80％。這說(shuō)明姜黃素／外泌體對(duì)脂多糖引起的感ran性休克有較好的zhiliao效果，從而提高了C57BL/6J模型鼠的存活率。研究者認(rèn)為，將外泌體作為姜黃素的載體時(shí)，可以增加Gr-1+細(xì)胞對(duì)姜黃素的攝取，從而句有更好的kang炎作用。
mＲNA也可以作為“貨物”被外泌體運(yùn)輸。利用多泡體(含外泌體)負(fù)載mＲNA/蛋白進(jìn)行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對(duì)HEK-293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其分泌的多泡體含有mＲNA/蛋白(CD-UPＲTEGFP，其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處，并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神經(jīng)鞘瘤的增長(zhǎng)被明顯抑制。這主要是由于CD和UPＲT可以將5-FC轉(zhuǎn)化為5氟尿嘧啶脫氧核苷酸(5-FdUMP)，而后者又是胸甘酸合成酶的抑制劑，可以抑制脫氧胸甘酸的合成，從而起到抑制DNA的合成以及促進(jìn)中流細(xì)胞凋亡的效果。Saydam等的研究表明多泡體/外泌體不jin可以有效輸送mＲNA/蛋白質(zhì)，并且句有與其他抗ai藥物聯(lián)合zhiliao中流的潛力。相同劑量的PTX，PTX-M1-Exos載藥體系和游離的PTX相比，對(duì)小鼠乳腺ai4T1的抑制率更高。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來(lái)分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過(guò)梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時(shí)間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個(gè)密度范圍又比較寬。裝載連翹苷（phil）的MHS來(lái)源外泌體具有完整茶托狀膜結(jié)構(gòu)的類圓形。安徽組織外泌體載藥
姜黃素裝載在牛奶來(lái)源的外泌體經(jīng)口服方式可以有效地調(diào)控靶細(xì)胞。河南細(xì)胞外泌體載藥實(shí)驗(yàn)大概費(fèi)用
外泌體載帶蛋白質(zhì)藥物的方法包括直接和間接兩種載yao方式。間接載yao方式是目前實(shí)現(xiàn)外泌體載帶目標(biāo)蛋白質(zhì)的主要方法，通過(guò)基因工程使目標(biāo)蛋白質(zhì)核酸轉(zhuǎn)染供體細(xì)胞，待供體細(xì)胞表達(dá)目標(biāo)蛋白質(zhì)后，分離純化其培養(yǎng)基，得到載帶有目標(biāo)蛋白質(zhì)的外泌體遞送系統(tǒng)。主要缺點(diǎn)是載藥周期長(zhǎng)、載藥量和載藥過(guò)程不可控，在一定程度上限制該方法在構(gòu)建外泌體遞送系統(tǒng)上的應(yīng)用；直接載yao方式是指不涉及外泌體供體細(xì)胞，直接通過(guò)某種化學(xué)或物理作用將外源性蛋白質(zhì)載入外泌體中的方法。因周期短、操作簡(jiǎn)單、過(guò)程可控等優(yōu)點(diǎn)，成為一種極句前景的研究方法。河南細(xì)胞外泌體載藥實(shí)驗(yàn)大概費(fèi)用