外泌體的組成較為復(fù)雜，其內(nèi)含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán)，而后被靶細(xì)胞吸收，從而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞基因表達(dá)和細(xì)胞功能。此外，外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達(dá)，參與細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)。有研究表明，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強(qiáng)種瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、介導(dǎo)種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)展?；顑?nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。湖南外泌體Western blot檢測(cè)
研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時(shí)也表達(dá)胎盤特異性蛋白分子，證明通過(guò)這種方法獲得的外泌體是胎盤來(lái)源外泌體。通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn)，動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過(guò)PKH67熒光染料染色后，與細(xì)胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來(lái)源的外泌體。本研究通過(guò)蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來(lái)源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對(duì)其進(jìn)行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。天津海洋動(dòng)物組織外泌體wb實(shí)際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。
前列腺ai患者尿液外泌體中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表達(dá)水平明顯上升，表明這些miRNAs可用于前列腺ai的早期篩查。膽管ai是惡性程度較高的消化系統(tǒng)中流，發(fā)展隱蔽且臨床癥狀及體征出現(xiàn)晚，故給早期診斷帶來(lái)困難。高通量小RNA測(cè)序篩查了來(lái)自膽管ai和膽囊ai患者外泌體中一系列差異表達(dá)的miRNA，小RNA長(zhǎng)度在正常個(gè)體、膽管ai患者和膽囊ai患者之間的分布存在明顯差異，膽管ai患者的外泌體中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p、miR-4732-3p明顯升高，而膽囊ai患者的外泌體中miR-151a-5p略有升高，為膽管ai和膽囊ai提供了一套新的生物診斷標(biāo)志物。
細(xì)胞分泌外泌體的過(guò)程一般分為三個(gè)階段: (1) 質(zhì)膜內(nèi)陷, 形成早期內(nèi)吞小泡; (2) 內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟, 形成多囊泡體; (3) 多囊泡體與質(zhì)膜融合, 并釋放出囊泡內(nèi)容物, 形成外泌體。外泌體具有獨(dú)特的理化性質(zhì), 其密度為1.13~1.19 g/mL, 由平均厚度小于5 nm的雙層脂膜所包裹, 具有典型杯狀形態(tài), 呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈, 其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成, 另有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子, 其中主要為蛋白質(zhì), 且大部分蛋白為所有來(lái)源外泌體所共有, 只有小部分與其來(lái)源有關(guān), 為其分泌細(xì)胞的特有蛋白, 能夠反映分泌細(xì)胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外, 外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸, 并將其運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞, 發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。miRNA是中流外泌體檢測(cè)中較常見(jiàn)的標(biāo)志物。
外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu), 其穩(wěn)定性較好, 可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響, 從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前, 常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存, 但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變, 也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集, 反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定, 血漿存放于4 °C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解, 在–20 °C下長(zhǎng)期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解, 但miRNA卻十分穩(wěn)定, 這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。外泌體主要由蛋白質(zhì)和脂質(zhì)組成。湖南外泌體Western blot檢測(cè)
外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。湖南外泌體Western blot檢測(cè)
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。湖南外泌體Western blot檢測(cè)