河北水果外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-02

外泌體本身的惰性相當(dāng)高,但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣,因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先,對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次,現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)??梢酝ㄟ^(guò)檢測(cè)CD9、CD63和CD81等外泌體標(biāo)志物來(lái)判斷外泌體是否存在。河北水果外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)

流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低,所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射,操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM),將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm,能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè),并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),目前該儀器已商品化。河北水果外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)人體內(nèi)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,包括干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、及平滑肌細(xì)胞等。

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān),同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過(guò)外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞,與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子,構(gòu)建適合病細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外,病細(xì)胞來(lái)源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近,有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞,受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲(chóng)通過(guò)外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲(chóng)的活動(dòng)。

與正常細(xì)胞相比,中流細(xì)胞外泌體的分泌量增多,內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結(jié)構(gòu)的保護(hù),中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細(xì)胞來(lái)源的活性生物分子,其特點(diǎn)包括:(1)提供具有穩(wěn)定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運(yùn)輸至遠(yuǎn)端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠與靶細(xì)胞之間進(jìn)行更有效的信息交流。外泌體介導(dǎo)中流轉(zhuǎn)移:體外研究和體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)表明惡性中流細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠(yuǎn)端中流中惡性程度較低的ai細(xì)胞攝入,其內(nèi)所包含的與轉(zhuǎn)移相關(guān)的mRNAs進(jìn)入轉(zhuǎn)移性較低的細(xì)胞后,能夠增強(qiáng)其轉(zhuǎn)移能力。外泌體表面具有特定的蛋白標(biāo)志物,其內(nèi)含物也極為豐富。

瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)不斷地將外泌體釋放到周?chē)h(huán)境中去,同時(shí),外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間,可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術(shù)的進(jìn)步,已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領(lǐng)域,外泌體中存在黑色素瘤標(biāo)志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關(guān)蛋白,且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者,通過(guò)檢測(cè)MIA和S100B表達(dá)水平對(duì)黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說(shuō),液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來(lái)源上的延伸,進(jìn)一步豐富了檢測(cè)手段,而隨著外泌體的不斷揭秘,相信其會(huì)在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。外泌體又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。植物根組織外泌體鑒定

隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。河北水果外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)

外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu), 其穩(wěn)定性較好, 可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響, 從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前, 常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存, 但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變, 也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集, 反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定, 血漿存放于4 °C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解, 在–20 °C下長(zhǎng)期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解, 但miRNA卻十分穩(wěn)定, 這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。河北水果外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)