自噬在HBV相關(guān)HCC發(fā)生的發(fā)展中起重要作用,且與HBx關(guān)系密切,一項關(guān)于攜帶HBx表達(dá)基因的腺病毒載體疫苗的研究表明,該疫苗可使肝病細(xì)胞表達(dá)HBx,并通過自噬途徑誘發(fā)增強CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞的抗瘤免疫效應(yīng)。有研究表明,肝病的特異性抗原AFP在肝病細(xì)胞中抑制細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡,進(jìn)而促進(jìn)瘤增殖轉(zhuǎn)移,其機制可能是通過PI3K/Akt/mTOR途徑。疫苗是預(yù)防肝病發(fā)生比較經(jīng)濟(jì)有效的方式,疫苗都與自噬關(guān)系密切,故明確自噬在其中的具體機制可能有益于新疫苗的研發(fā),可能為肝病預(yù)防提供潛在的靶點。自噬是一系列自噬體結(jié)構(gòu)演變的過程,由自噬相關(guān)基因執(zhí)行精細(xì)的調(diào)控。杭州細(xì)胞自噬電鏡檢測
大自噬,也就是通常說的自噬,是真核細(xì)胞蛋白降解的途徑之一。自噬可以被描述為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的成分(細(xì)胞器、蛋白等)被雙層膜的囊泡包裹,形成自噬體,進(jìn)而傳遞到溶酶體進(jìn)行降解的過程。詳細(xì)來說,自噬過程與內(nèi)涵體途徑密不可分。一方面,自噬體能夠與晚期內(nèi)體融合形成中間囊泡較終形成自噬溶酶體;另一方面,自噬體能夠直接與溶酶體融合形成自噬溶酶體。無論通過哪條途徑,自噬溶酶體較終通過酸性水解酶將細(xì)胞器、蛋白等消化分解。細(xì)胞本底水平的自噬發(fā)生在營養(yǎng)充足的條件下,可保護(hù)細(xì)胞免受錯誤折疊蛋白或受損細(xì)胞器的影響,從而防止某些疾病的發(fā)生(如神經(jīng)退行性疾病和病癥)。饑餓等也可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生,通過降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器為細(xì)胞活動提供營養(yǎng)和能量。自噬性溶酶體是一種自體吞噬泡,作用底物是內(nèi)源性的,即細(xì)胞內(nèi)的蛻變、破損的某些細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)。成都細(xì)胞自噬通路高脂飲食則會導(dǎo)致機體的自噬受損,從而加速非酒精性脂肪肝向肝病方向發(fā)展。
自噬體是自噬的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)。自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),直徑一般為300~900nm,平均500nm,普通光鏡下看不到。通過透射電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)自噬體一直是觀察自噬現(xiàn)象常用的方法,是自噬檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)是使用較多的一類電鏡。通過發(fā)射電子束從而穿過超薄的樣品,同時與樣本相互作用,既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數(shù)高的優(yōu)點。其分辨率為0.1-0.2nm,放大倍數(shù)為幾萬到幾十萬倍。
通常情況下,除了研究自噬現(xiàn)象本身,大家更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結(jié)合起來,把自噬作為這些方向的一個機制來研究。通常的研究模式:1)證明自噬參與了相關(guān)研究表型(電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細(xì)胞定位、LC3熒光示蹤監(jiān)測自噬流等)2)證明自噬在表型中起到關(guān)鍵作用(通過自噬抑制劑、激動劑進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究)3)找到表型與自噬橋梁分子(檢測pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員)4)在基因?qū)用嫱ㄟ^gainof/lostoffunction研究橋梁分子在自噬中的作用。自噬并不引發(fā)細(xì)胞死亡,相反促進(jìn)細(xì)胞存活。
強度比較大的運動是開啟自噬比較好的方法,另一項研究中,低強度和比較強的度運動組分別進(jìn)食和禁食。然后得出結(jié)論:比起飲食,啟動人體骨骼肌自噬的較有效策略是運動強度,劇烈運動是肌肉自噬的較有效誘因。此外,劇烈運動下的自噬會增加生長因子,從而加速肌肉修復(fù)。因此,在運動鍛煉中偶爾進(jìn)行沖刺或在每周運動計劃里添加1-2次的比較強的度間歇訓(xùn)練(HIIT),或者比較強的度的力量訓(xùn)練,更容易啟動自噬。通過運動、線粒體啟動劑等可以增強肥胖、糖尿病等代謝類疾病個體的線粒體自噬活性,從而減少受損線粒體的堆積,進(jìn)而降低胰島素抵抗。自噬體能夠與晚期內(nèi)體融合形成中間囊泡終形成自噬溶酶體。江西細(xì)胞自噬小體
自噬體與溶酶體融合,成為自溶體,一些被隔離的貨物被降解,然后回收以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。杭州細(xì)胞自噬電鏡檢測
在研究自噬與凋亡的關(guān)系時,人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞死亡前胞漿中存在大量的自噬體或自噬溶酶體,但這樣的細(xì)胞缺乏凋亡的典型特點,如核固縮),核破裂、細(xì)胞皺縮、沒有凋亡小體的形成等,被稱為自噬樣細(xì)胞死亡,它是一種新的細(xì)胞程序性死亡,為了與凋亡區(qū)別,被命名為TypeIIcelldeath,相應(yīng)的,凋亡為TypeIcelldeath,壞死為TypeIIIcelldeath。盡管這樣,但對于自噬是否是細(xì)胞死亡的直接原因目前還存在比較大的爭議。到底是Celldeathbyautophagy(自噬引起死亡)還是Celldeathwithautophagy(死亡時有自噬發(fā)生,但不是直接原因)?對此,自噬研究領(lǐng)域“大?!奔?*LevineBeth在一篇nature的Review中表達(dá)了自己的觀點。由于在形態(tài)學(xué)上2者無明顯區(qū)別,但通過阻斷自噬,觀察細(xì)胞的結(jié)局可區(qū)分開來:Celldeathbyautophagy細(xì)胞存活,而Celldeathwithautophagy細(xì)胞死亡。自噬既能阻止也能促進(jìn)細(xì)胞凋亡,兩種反應(yīng)在生物體內(nèi)普遍存在。杭州細(xì)胞自噬電鏡檢測