江西雙熒光自噬

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-02-28

到目前為止伴隨使用自噬晚期抑制劑,通過(guò)檢測(cè)LC3B-I/II 轉(zhuǎn)化是自噬流檢測(cè)的金指標(biāo)。當(dāng)使用自噬晚期抑制劑巴弗洛霉素 A1 (bafilomycin A1, Baf A1)刺激細(xì)胞時(shí),細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體降解被抑制,此時(shí)觀察到的 LC3B-II 的變化jindaibiao自噬小體數(shù)量的改變。當(dāng)細(xì)胞自噬流活化后,LC3B-II 的含量會(huì)在使用 Baf A1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增加,而當(dāng)細(xì)胞自噬流阻斷后, LC3B-II 的含量則不會(huì)在使用 Baf A1 的基礎(chǔ)上發(fā)生改變。除 Baf A1 外,其他一些能提高溶酶體 pH 值的自噬晚期抑制劑也可以用于自噬流的檢測(cè)。若待檢測(cè)藥物+Baf A1 組 LC3B-II 與jin Baf A1 處理組相比明顯增加則daibiao所檢測(cè)藥物可以增加自噬小體或自噬溶酶體的合成。相反,若處理組與對(duì)照組相比,LC3B-II 降低則daibiao處理藥物減少自噬小體的合成。雖然自體吞噬不直接破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核,但斷裂或消化剛發(fā)生時(shí),細(xì)胞膜和細(xì)胞核會(huì)變成溶酶體消化分解自身。江西雙熒光自噬

自噬通過(guò)分解并清理受損的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器來(lái)達(dá)到清潔細(xì)胞的效果,該過(guò)程對(duì)于神經(jīng)元等壽命較長(zhǎng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)十分重要,由于神經(jīng)元不再能夠進(jìn)行細(xì)胞分裂,因此特別容易積聚對(duì)自身有害的蛋白質(zhì)和受損的細(xì)胞器。在他們的新研究中,科學(xué)家表明,老鼠大腦中的神經(jīng)元不需要自噬就可以存活。此外,這些神經(jīng)元細(xì)胞通過(guò)自噬相關(guān)蛋白來(lái)調(diào)節(jié)對(duì)學(xué)習(xí)和記憶至關(guān)重要的分子微管轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。自噬對(duì)大腦的健康至關(guān)重要,這一事實(shí)得到了近十年來(lái)科學(xué)發(fā)現(xiàn)的支持??茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)自噬的新功能表明,對(duì)患者自噬活性的診治性調(diào)節(jié)不只可以促進(jìn)腦部廢物清理,還可以通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的效率來(lái)改變認(rèn)知能力。自噬性溶酶體是一種自體吞噬泡,作用底物是內(nèi)源性的,即細(xì)胞內(nèi)的蛻變、破損的某些細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)。成都藥物治療自噬正常細(xì)胞自噬增強(qiáng),可表現(xiàn)出阻止腫細(xì)胞發(fā)生的功能。

大自噬,也就是通常說(shuō)的自噬,是真核細(xì)胞蛋白降解的途徑之一。自噬可以被描述為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的成分(細(xì)胞器、蛋白等)被雙層膜的囊泡包裹,形成自噬體,進(jìn)而傳遞到溶酶體進(jìn)行降解的過(guò)程。詳細(xì)來(lái)說(shuō),自噬過(guò)程與內(nèi)涵體途徑密不可分。一方面,自噬體能夠與晚期內(nèi)體融合形成中間囊泡較終形成自噬溶酶體;另一方面,自噬體能夠直接與溶酶體融合形成自噬溶酶體。無(wú)論通過(guò)哪條途徑,自噬溶酶體較終通過(guò)酸性水解酶將細(xì)胞器、蛋白等消化分解。細(xì)胞本底水平的自噬發(fā)生在營(yíng)養(yǎng)充足的條件下,可保護(hù)細(xì)胞免受錯(cuò)誤折疊蛋白或受損細(xì)胞器的影響,從而防止某些疾病的發(fā)生(如神經(jīng)退行性疾病和病癥)。饑餓等也可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生,通過(guò)降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器為細(xì)胞活動(dòng)提供營(yíng)養(yǎng)和能量。自噬性溶酶體是一種自體吞噬泡,作用底物是內(nèi)源性的,即細(xì)胞內(nèi)的蛻變、破損的某些細(xì)胞器或局部細(xì)胞質(zhì)。

肝病中瘤免疫與自噬的關(guān)系尚未完全明確。研究表明,缺乏自噬的肝臟Kupffer細(xì)胞可以通過(guò)mtROS-NF-κB-IL-1a/b通路促進(jìn)肝硬化和肝病發(fā)展。自噬缺陷協(xié)同脂質(zhì)堆積可造成肝內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞耗竭。細(xì)胞自噬還被證實(shí)可被誘導(dǎo)增強(qiáng)TGFβ介導(dǎo)的抗瘤作用,IFNγ可通過(guò)非凋亡性細(xì)胞死亡抑制Huh7肝病細(xì)胞增殖,敲除自噬后,IFNγ抑制肝病細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)肝病細(xì)胞死亡的作用消失。研究表明自噬可通過(guò)抑制抑病基因的表達(dá)或活化原病基因促進(jìn)肝病發(fā)生。在ATG5敲除的小鼠模型中,由于自噬缺陷,抑病基因p53表達(dá)增加,小鼠只發(fā)生肝良性瘤而不惡變。這進(jìn)一步提示,自噬在肝病發(fā)生中的作用及機(jī)制非常復(fù)雜,可能受到諸多因素調(diào)控,但其重要性則毋庸置疑,仍需更多的研究探索其機(jī)制。鑒于自噬在肝病發(fā)生的發(fā)展過(guò)程和機(jī)體免疫中的重要作用,研究自噬的作用機(jī)制能為肝病免疫治理找到新的靶點(diǎn)。

LC3活化并插入吞噬泡膜:LC3(在酵母中為Atg8)是一種微管相關(guān)蛋白,平時(shí)以全長(zhǎng)形式普遍分布于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)自噬信號(hào)出現(xiàn)時(shí),LC3的C端氨基酸先被Atg4移除,然后被Atg7活化,成為L(zhǎng)C3-I。在Atg3的介導(dǎo)下,LC3-I較終在上文中提到的Atg5-Atg12-Atg16L復(fù)合物催化下,連接上一個(gè)磷脂酰乙醇胺分子,使其可以插入吞噬泡膜中,成為鉚定的的LC3-II。LC3-II在促進(jìn)吞噬泡與待降解細(xì)胞器的膜融合,以及識(shí)別待降解細(xì)胞器中扮演了重要的角色。由于LC3-II的形成是依賴活化信號(hào)的,所以熒光標(biāo)識(shí)的LC3已被普遍用作自噬小體形成的生物標(biāo)記。需要注意的是,在哺乳動(dòng)物中,LC3有三種亞型(LC3A,LC3B,LC3C),但只有LC3B-II與吞噬泡增加有關(guān),故而宜使用anti-LC3B抗體標(biāo)記LC3。另外,從前有人認(rèn)為,LC3-II和LC3-I的比例可以作為衡量自噬活躍程度的指標(biāo),但現(xiàn)在普遍認(rèn)為,只需測(cè)定LC3-II的表達(dá)即可反映自噬活躍程度。在細(xì)胞遭受代謝應(yīng)激、藥物調(diào)整和放射性損傷時(shí),自噬也是維護(hù)基因完整性的重要機(jī)制。臺(tái)州透射電鏡觀察自噬

在組織細(xì)胞受到各種理化因素傷害時(shí),自噬性溶酶體大量增加,因此對(duì)細(xì)胞的損傷起一種保護(hù)作用。江西雙熒光自噬

自噬是細(xì)胞內(nèi)的一種自食(Self-eating)的現(xiàn)象,自噬和凋亡二者共用相同的刺激因素和調(diào)節(jié)蛋白,但是誘發(fā)閾值和門(mén)檻不同,如何轉(zhuǎn)換和協(xié)調(diào)目前還不清楚。自噬是指膜(目前來(lái)源還有爭(zhēng)議,大部分表現(xiàn)為雙層膜,有時(shí)多層或單層)包裹部分胞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)需降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等形成自噬體(autophagosome),結(jié)尾與溶酶體融合形成自噬溶酶體(autophagolysosome),降解其所包裹的內(nèi)容物,以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞器的更新。線粒體自噬通過(guò)自噬降解胞內(nèi)受損或多余的線粒體,是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵機(jī)制之一。江西雙熒光自噬