l 慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達：將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中，隨后用此慢病毒傳播細胞，使細胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究：將標(biāo)記的外泌體加入受體細胞培養(yǎng)基中，與受體細胞進行共培養(yǎng)，觀察細胞的功能變化，如細胞增殖、遷移與侵襲、細胞凋亡等；或者將外泌體注射入動物模型中，觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。外泌體（exosomes）是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜，直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。干細胞外泌體有減少細胞凋亡、促進血管生成、抑制纖維化等重要生物學(xué)功能，在調(diào)控組織再生方面有好的前景。細胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)
目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質(zhì)，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此，日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠，再經(jīng)過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離，提取高純度的完整外泌體。杭州腦脊液外泌體外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。
外泌體本身的惰性相當(dāng)高，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學(xué)功能，因此，外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣，因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治理，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先，對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次，現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟有效的外泌體分離技術(shù)。
腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追隨分子（NTA）和marker WB鑒定。所有的細胞都能分泌外泌體，但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。建立記錄各論文實驗條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。
外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡，是細胞間傳遞信號，相互溝通和影響的重要工具，它可以直接進入受體細胞影響細胞功能。外泌體PK細胞因子：磷脂雙層膜結(jié)構(gòu)，可保護內(nèi)容物，包含多種細胞因子可直接進入受體細胞。外泌體PK干細胞：無免疫排斥，體積小穿透力強，可避免倫理道德爭議。年輕的脂肪組織中提取外泌體，在特定條件下擴大培養(yǎng)出具有調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細胞功能的外泌體，包含多種細胞因子的外泌體直接進入毛發(fā)根部的囊細胞，恢復(fù)毛發(fā)根部的囊干細胞的正常功能。目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。河南腹水外泌體染色
隨著EV研究倍受世界矚目，各國啟動了大型研究項目。細胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)
肺病細胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激種瘤血管的形成來促進種瘤的生長。據(jù)相關(guān)報道稱，LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進種瘤血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加，促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT，從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖，遷移能力?？茖W(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機制功能。細胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)