樣本預(yù)處理與外泌體分離、保存：外泌體存在于人類或動物的各種體液中，我們可以選擇不同的樣本來源進(jìn)行相關(guān)的外泌體研究。由于外泌體是來源于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷的含有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的多泡小體，分布于胞外基質(zhì)。為了獲得高純度的外泌體，必須確保有效去除所有的細(xì)胞碎片及其他不需要的雜質(zhì)。不同的實驗樣本采集時需要注意的地方不一樣，如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清培養(yǎng)、血漿樣本采集時用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集時需要加抑菌劑等。與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目。細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術(shù)，允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒，客戶一次性能夠分析多達(dá)9個不同的樣本，很大節(jié)省了時間和經(jīng)濟(jì)成本。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)兼容各種生物樣本，除了純化的外泌體之外，對于血液、尿液、腹水中的外泌體也可直接檢測分析，很大拓展了研究范圍。全自動的可對單個外泌體進(jìn)行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全部的外泌體表征信息，包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達(dá)、生物標(biāo)志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作簡單，結(jié)果可靠。一經(jīng)推出，便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的普遍關(guān)注，短短兩年時間在全球已有50多個實驗室采用該技術(shù)，發(fā)表重要文獻(xiàn)近百篇。唾液外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。
目前的主流觀點(diǎn)認(rèn)為，外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicular bodies，MVB），后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體早見于1981年，EG Trams 等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為 exosome。對于外泌體的作用，當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年G Raposo 等發(fā)現(xiàn)類似于B 淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigen presenting vesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+ 細(xì)胞的抗種瘤反應(yīng)。2007 年H Valadi 等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA 交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、種瘤生長于侵襲等各種生物過程中。
一類外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易?、熱休克蛋白家族。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白（RPS3）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細(xì)胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子、細(xì)胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標(biāo)的診斷窗口。
外泌體是新型治理劑，惡性瘤細(xì)胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對外泌體的質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn)，惡性瘤細(xì)胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR），可以抑制宿主細(xì)胞α型干擾素(IFN-α)的產(chǎn)生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下，也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據(jù)。除了瘤，外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關(guān)臨床試驗也在世界范圍內(nèi)開展中。外泌體天然的可以攜帶遺傳到靶細(xì)胞中，從而在生物學(xué)和致病過程中誘導(dǎo)遺傳修飾。江西血清外泌體染色PKH67/PKH26
實際上，用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26
肺病細(xì)胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激種瘤血管的形成來促進(jìn)種瘤的生長。據(jù)相關(guān)報道稱，LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進(jìn)種瘤血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加，促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT，從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖，遷移能力?？茖W(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26