河南血清外泌體示蹤

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-10-18

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞,期望開(kāi)發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后,體液可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存,因此外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出,特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體,其與正常細(xì)胞來(lái)源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目,并作為癥狀早期診斷技術(shù),應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記,髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合。河南血清外泌體示蹤

外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門(mén)。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙??贵w親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無(wú)法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問(wèn)題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法,又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。腹膜透析液外泌體Dil目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。

外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),NY-ESO-1是單獨(dú)對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。

由于這些胞外囊泡(EV)與生理和病理狀況之間的關(guān)系,人們對(duì)EV的興趣呈指數(shù)增長(zhǎng)。 EVs對(duì)新型診斷和臨床轉(zhuǎn)化有很大希望。近的研究已經(jīng)將這些交流所需的一些任務(wù)歸結(jié)為細(xì)胞外囊泡(如外泌體和微泡),主要參與髓鞘膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元之間的相互信號(hào)傳遞從而促進(jìn)神經(jīng)元存活、由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認(rèn)為是神經(jīng)變性疾病和腦病擴(kuò)散的重要因素。這些細(xì)胞外囊泡功能為以前無(wú)法識(shí)別的神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)跨細(xì)胞相互作用增加了新方式。關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。

外泌體是由各種細(xì)胞分泌的小型膜囊泡(直徑30~100nm),存在于大多數(shù)體液(如血液、尿液、髓液等)和細(xì)胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質(zhì)雙層膜包被的膜囊泡,產(chǎn)生于稱(chēng)為多囊泡體的細(xì)胞外囊泡中,多囊泡體通過(guò)與細(xì)胞膜融合將外泌體釋放到細(xì)胞外。外泌體含核內(nèi)體來(lái)源的蛋白質(zhì)(如ESCRTs)、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸相關(guān)蛋白(如RabGTPase等)及細(xì)胞膜來(lái)源蛋白(如CD63, CD81等)等各種內(nèi)分泌細(xì)胞來(lái)源的蛋白和RNA,同時(shí)還含有分泌細(xì)胞膜來(lái)源和內(nèi)體膜來(lái)源的脂質(zhì)(如膽固醇和鞘磷脂等)。癥狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與癥狀進(jìn)展相關(guān)的分子。成都外泌體PKH67

因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。河南血清外泌體示蹤

l 親脂染料標(biāo)記外泌體:目前已發(fā)表的外泌體文章中,外泌體大多使用親脂性染料進(jìn)行標(biāo)記,體內(nèi)和體外都有較多應(yīng)用。親脂性染料主要分為兩大類(lèi),一類(lèi)是PKH67(綠色熒光)/PKH26(紅色熒光),由于它們可以與外泌體的脂質(zhì)雙層膜穩(wěn)定結(jié)合,所以染色效果較好,應(yīng)用較普遍。第二類(lèi)是Di系列的親脂性染料,包括DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光)。其中DiR的紅外熒光可穿透細(xì)胞和組織,在活成像中用來(lái)示蹤。河南血清外泌體示蹤