湖北細(xì)胞上清外泌體透射電鏡檢測

來源: 發(fā)布時間:2021-04-30

隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn),近年來,應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。例如,血液中的成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體,可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的移動和增殖以及血管新生來促進(jìn)傷口愈合。有報導(dǎo)指出,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。從癥狀患者樹突狀細(xì)胞釋放的外泌體中,含有各種癥狀細(xì)胞來源的蛋白質(zhì),可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。利用此功能的抗種瘤免疫療法,目前正處于初期臨床研究階段。外泌體是細(xì)胞在特定條件下分泌的小囊泡,是細(xì)胞間傳遞信號,相互溝通和影響的重要工具。湖北細(xì)胞上清外泌體透射電鏡檢測

全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術(shù),允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒,客戶一次性能夠分析多達(dá)9個不同的樣本,很大節(jié)省了時間和經(jīng)濟(jì)成本。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)兼容各種生物樣本,除了純化的外泌體之外,對于血液、尿液、腹水中的外泌體也可直接檢測分析,很大拓展了研究范圍。全自動的可對單個外泌體進(jìn)行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全部的外泌體表征信息,包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達(dá)、生物標(biāo)志物(CD9,CD81,CD63等)共定位等。操作簡單,結(jié)果可靠。一經(jīng)推出,便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的普遍關(guān)注,短短兩年時間在全球已有50多個實(shí)驗(yàn)室采用該技術(shù),發(fā)表重要文獻(xiàn)近百篇。福建腹水外泌體粒徑檢測外泌體不只可作為疾病診斷的生物標(biāo)志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。

外泌體(Exosome)是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu);存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、RNA等重要信息,不只在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。

外泌體早見于1981年,EG Trams 等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為 exosome。對于外泌體的作用,當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年G Raposo 等發(fā)現(xiàn)類似于B 淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigen presenting vesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+ 細(xì)胞的抗種瘤反應(yīng)。2007 年H Valadi 等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA 交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、種瘤生長于侵襲等各種生物過程中。免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法。

從生物體液中分離外泌體的各種方法已經(jīng)被開發(fā)出來,主要根據(jù)外泌體的大小、密度、免疫特性等特點(diǎn)進(jìn)行操作。分離出高純度的外泌體是我們后續(xù)開展外泌體研究的關(guān)鍵步驟,目前差速超速離心是外泌體分離方法中公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,也是分高文章中主選的分離方法。外泌體提取在短時間(一周之內(nèi))使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。黑龍江CD63外泌體慢病毒

細(xì)胞表面受體表達(dá)不同,外泌體對受體細(xì)胞的影響可能不同,可能誘導(dǎo)細(xì)胞存活,也可能誘導(dǎo)凋亡或免疫調(diào)節(jié)等。湖北細(xì)胞上清外泌體透射電鏡檢測

在種瘤微環(huán)境中,種瘤細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,壓制機(jī)體的抗種瘤免疫反應(yīng);肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并開啟TLR8,使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號通路活化,從而導(dǎo)致種瘤的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中,細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報道稱,NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,開啟的T細(xì)胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病醫(yī)治的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)種瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。湖北細(xì)胞上清外泌體透射電鏡檢測