細(xì)胞上清外泌體測(cè)序

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、種瘤侵襲等方方面面。有研究表明種瘤來(lái)源的外泌體參與到種瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了種瘤的生長(zhǎng)與侵襲。外泌體給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙。細(xì)胞上清外泌體測(cè)序

建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫(kù)也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面，隨著EV研究倍受世界矚目，各國(guó)啟動(dòng)了大型研究項(xiàng)目。美國(guó)啟動(dòng)NIH戰(zhàn)略性大型項(xiàng)目（Extracellular RNA Communication），國(guó)際厲害性學(xué)會(huì)——Gordon和Keystone Symposia也從2016開(kāi)始成立會(huì)議小組。受到歐洲藥物研究開(kāi)發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織（IMI）”的支持推進(jìn)的CANCER-ID項(xiàng)目，也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開(kāi)發(fā)戰(zhàn)略的目標(biāo)之一，期待會(huì)加速今后的研究發(fā)展。無(wú)論如何，今后EV研究的根本就是必須有強(qiáng)有力的研究方法和技術(shù)，而PS親和法有望成為其中之一。江西外泌體NTA外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即：對(duì)各種外泌體的分類。

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質(zhì)，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機(jī)、無(wú)法進(jìn)行多樣品分析等問(wèn)題。因此外泌體研究相對(duì)困難，需要盡快開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此，日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過(guò)磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠，再經(jīng)過(guò)含有EDTA的洗脫緩沖液進(jìn)行分離，提取高純度的完整外泌體。

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡（EVs）表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式，作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡，由大多數(shù)細(xì)胞分泌。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后，人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)，并且觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。在過(guò)去幾年中，有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了各種細(xì)胞類型的外泌體分泌，并討論了其潛在的生物學(xué)功能。然而，我們對(duì)于EV形成的分子機(jī)制知識(shí)的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)。

幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體，同時(shí)外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前對(duì)于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)。近年來(lái)，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及種瘤醫(yī)治領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。海洋生物外泌體PKH67

以前無(wú)法用超速離心法提取的微囊泡，也通過(guò)運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。細(xì)胞上清外泌體測(cè)序

在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢(shì)下，外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來(lái)源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對(duì)不同的患者制定合適的醫(yī)治方案，以達(dá)到改善肺病患者生存率，延長(zhǎng)肺病患者生存時(shí)間的目的。但是，針對(duì)外泌體的研究還存在諸多的問(wèn)題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號(hào)通路等?？偠灾?，外泌體的研究有著廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施，造福更多的患者。細(xì)胞上清外泌體測(cè)序