l 慢病毒介導CD63-GFP表達:將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達元件構建成質粒再包裝到慢病毒中,隨后用此慢病毒傳播細胞,使細胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究:將標記的外泌體加入受體細胞培養(yǎng)基中,與受體細胞進行共培養(yǎng),觀察細胞的功能變化,如細胞增殖、遷移與侵襲、細胞凋亡等;或者將外泌體注射入動物模型中,觀察動物表型變化和檢測動物相關指標。外泌體(exosomes)是一種能被機體內大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜,直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關。利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕思毎小3啥冀M織外泌體
外泌體(Exosome)是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質雙分子層結構;存在于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;外泌體攜帶有多種蛋白質、脂類、RNA等重要信息,不只在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。體液外泌體攝取外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成。
外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。近些年關于外泌體研究很普遍,但是關于外泌體相關的實驗技術,關于需要改進的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質,給后續(xù)實驗產生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法,又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術,允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒,客戶一次性能夠分析多達9個不同的樣本,很大節(jié)省了時間和經濟成本。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)兼容各種生物樣本,除了純化的外泌體之外,對于血液、尿液、腹水中的外泌體也可直接檢測分析,很大拓展了研究范圍。全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設備。該設備能夠提供全部的外泌體表征信息,包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物(CD9,CD81,CD63等)共定位等。操作簡單,結果可靠。一經推出,便引起了外泌體領域科研工作者的普遍關注,短短兩年時間在全球已有50多個實驗室采用該技術,發(fā)表重要文獻近百篇。NTA技術已被作為外泌體表征手段之一。
外泌體中這些物質的結構與它們在分泌細胞內的結構不同,所以可能存在一種外泌體特異蛋白和mRNA/miRNA在外泌體內選擇性積累的機制。這種特異性可將外泌體內的RNA作為生物標記,更進一步作為醫(yī)治開發(fā)方法的靶點。外泌體中的mRNA一旦被靶細胞吞噬,能夠引起這個細胞內的功能性蛋白的表達,但外泌體中多數(shù)的miRNA是前體而非功能性miRNA,這些miRNA起著何種生理性意義,學者們正在研究。由于外泌體含有各種蛋白質、RNA和脂質,研究人員正將其進行細胞分類,建立數(shù)據(jù)庫(ExoCarta)。此外,在世界各地分別進行著運用蛋白質組學、轉錄組學和系統(tǒng)生物學的大規(guī)模分析工作,而FunRich的EV plugin作為一種通用的分析手段已被公布出來。今后,在推進外泌體研究方面,各領域的研究人員信息共享至關重要。應用Tim4的外泌體強結合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。廣州外泌體PKH67
細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式。成都組織外泌體
泌體是細胞內源性的小囊泡,由大多數(shù)細胞分泌。在抗原呈遞細胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后,人們對外泌體的興趣增強,并且觀察到它們可以在體內刺激免疫應答。在過去幾年中,有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學功能。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質,總結了其生物學效應,特別是免疫系統(tǒng),討論了分泌囊泡可能作為細胞間信使的潛在作用。細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內源性和質膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式,作為膜和細胞溶質蛋白、脂質和RNA細胞之間傳遞的載體。然而,我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內生理相關性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機制。成都組織外泌體