膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關(guān)注的問題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是,也已經(jīng)清楚,不同類型的分泌囊泡共存,具有不同的細(xì)胞內(nèi)起源和形成模式,因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細(xì)胞內(nèi)的多泡小體中形成,并且當(dāng)這些多泡小體與質(zhì)膜融合時分泌到細(xì)胞外。有趣的是,不同的分子家族已被證明參與細(xì)胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌,這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。黑龍江組織外泌體WB
l 納米顆粒追隨分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。l Western blot分子標(biāo)志物檢測:外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);參與生物功能的分子,如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X(ALIX)、種瘤易感基因101蛋白(TSG101)、熱休克蛋白(HSP70、HSP90),以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白。外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸,可以運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病醫(yī)治。湖南組織外泌體透射電鏡檢測外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì)。
外泌體是在研究網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟過程中被Johnstone等人發(fā)現(xiàn)并命名的。外泌體是一種球形的納米級細(xì)胞外囊泡,直徑30~100nm,密度1.13~1.19g/ml。在生理和病理條件下,外泌體都可以被一些細(xì)胞以胞吐的方式所釋放,如:免疫細(xì)胞、干細(xì)胞、種瘤細(xì)胞,并且其普遍分布于各種體液中,如:尿液、唾液、血液、羊水、腦脊液及病理性腹水等,同時,由于其起源于相應(yīng)的母細(xì)胞,故種瘤細(xì)胞來源的外泌體有望成為一種全新的非傾入性檢查替代以往的組織活檢技術(shù)。
在20世紀(jì)80年代,外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細(xì)胞外囊泡的興趣逐漸增加,因為它們似乎參與了很多細(xì)胞過程。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs,介導(dǎo)體內(nèi)不同細(xì)胞類型之間的細(xì)胞間通訊,從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近,科學(xué)家才認(rèn)識到將外泌體與其他類型的細(xì)胞外囊泡分開的困難,這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域,該綜述著重于外泌體和其他分泌的細(xì)胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生,分泌及其后續(xù)的命運(yùn),因為它們的功能依賴于這些重要過程。目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。一類外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,有文獻(xiàn)報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7 和 RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法。福建體液外泌體WB
隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。黑龍江組織外泌體WB
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠?qū)?50 nm的外泌體進(jìn)行全方面的表征,無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進(jìn)行純化,避免因純化帶來的樣本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群,在CD171過表達(dá)系統(tǒng)中,100 nm以上的外泌體只表達(dá)了CD171。通過抗體捕獲的模式,全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠量化含有不同標(biāo)記物的外泌體亞群,并對不同種群的外泌體進(jìn)行特異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化,并且線性范圍可跨越3個數(shù)量級。黑龍江組織外泌體WB