從細(xì)胞培養(yǎng)物中富集的總外泌體（使用“總外泌體分離”試劑或超速離心）可以通過免疫磁珠捕獲進(jìn)一步純化特定的亞群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特異性試劑，或?qū)㈡溍褂H和素試劑與您選擇的生物素化抗體結(jié)合，以基于表面抗原，純化所有群體。外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)， 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。浙江唾液外泌體
l 納米顆粒追隨分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。l Western blot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；參與生物功能的分子，如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X（ALIX）、種瘤易感基因101蛋白（TSG101）、熱休克蛋白（HSP70、HSP90），以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白。外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸，可以運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病醫(yī)治。遼寧CD63外泌體慢病毒包裝隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域。
過細(xì)胞分泌到外泌體中的分子引起的。其中已發(fā)現(xiàn)外泌體內(nèi)含有分泌細(xì)胞來源mRNA和miRNA，外泌體與細(xì)胞間遺傳基因表達(dá)信息的水平傳播相關(guān)性倍受矚目。這些RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所保護(hù)，不會被核糖核酸酶所分解，可以在血液和體液中穩(wěn)定存在。被靶細(xì)胞吞噬的外泌體通過與內(nèi)體膜融合，將RNA釋放到靶細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。釋放出來的mRNA翻譯為蛋白質(zhì)，但miRNA壓制目的基因的翻譯，因此外泌體在靶細(xì)胞內(nèi)控制基因的表達(dá)。外泌體的蛋白質(zhì)有數(shù)萬種，mRNA、miRNA的種類有數(shù)千種以上，它們的結(jié)構(gòu)除了受細(xì)胞來源不同的影響，還受到細(xì)胞狀態(tài)不同的影響。
外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn)，NY-ESO-1是單獨對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。
結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明，這項技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年，隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦，提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn)，計劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性。福建植物外泌體示蹤
外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡。浙江唾液外泌體
在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢下，外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案，以達(dá)到改善肺病患者生存率，延長肺病患者生存時間的目的。但是，針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號通路等?？偠灾?，外泌體的研究有著廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施，造福更多的患者。浙江唾液外泌體