河南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

來源: 發(fā)布時間:2021-11-20

外泌體(Exosome)是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu);存在于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、RNA等重要信息,不只在細胞與細胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。高濃度集聚誘導(dǎo)細胞死亡的TNF-α,可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。河南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

外泌體即細胞分泌的直徑約40-100 nm的微小膜泡,多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。一開始被當做細胞排泄物,但是近幾年,研究發(fā)現(xiàn)外泌體可謂是小身體大作用。種瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移后,如何靶向呈遞藥物一直是種瘤醫(yī)治中的一個巨大挑戰(zhàn)。發(fā)表于Nano Lett的一項研究中,研究人員利用外泌體制備藥物的遞送系統(tǒng)(LD-MDS),并取得成功。在這項研究中,研究人員將相關(guān)藥物錨定在活巨噬細胞膜上,細胞自身相關(guān)蛋白酶響應(yīng)開啟并將藥物轉(zhuǎn)載進入外泌體,順利遞送至肺轉(zhuǎn)移灶并且轉(zhuǎn)化為納米囊泡和次級納米囊泡,促進轉(zhuǎn)移性4T1病細胞的有效內(nèi)化和細胞死亡。之后,受損的4T1病細胞可以釋放次級納米囊泡和游離藥物分子,再破壞鄰近的病細胞。研究顯示, LD-MDS對體內(nèi)直徑小于100μm的肺轉(zhuǎn)移病灶顯示出優(yōu)異的靶向效率,并顯著壓制肺轉(zhuǎn)移。湖北外泌體示蹤與正常細胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目。

肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激種瘤血管的形成來促進種瘤的生長。據(jù)相關(guān)報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進種瘤血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖,遷移能力。

泌體是細胞內(nèi)源性的小囊泡,由大多數(shù)細胞分泌。在抗原呈遞細胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后,人們對外泌體的興趣增強,并且觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。在過去幾年中,有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學(xué)功能。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì),總結(jié)了其生物學(xué)效應(yīng),特別是免疫系統(tǒng),討論了分泌囊泡可能作為細胞間信使的潛在作用。細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式,作為膜和細胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細胞之間傳遞的載體。然而,我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機制。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。

目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法,但這些方法混有非常多的雜質(zhì),必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定,不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難,需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此,日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸(PS)法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠,再經(jīng)過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離,提取高純度的完整外泌體。隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn),近年來,應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。河南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。河南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

多年來,外泌體被認為參與無用的細胞內(nèi)含物質(zhì)的釋放。但是近年來,外泌體在活內(nèi)作為運載脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA等細胞間信息傳遞的新型媒介而倍受矚目。隨著其功能在生理及病理功能的闡明,外泌體在臨床應(yīng)用的相關(guān)研究中,特別是診斷醫(yī)治、生物標記的開發(fā)也迅速發(fā)展起來?,F(xiàn)在,外泌體研究幾乎涉及所有的研究領(lǐng)域(免疫、神經(jīng)系統(tǒng)、癥狀、內(nèi)分泌、循環(huán)系統(tǒng)等)。例如,免疫細胞來源的外泌體含有抗原肽/MHC復(fù)合體和可能控制著免疫細胞間抗原信息的交換、免疫細胞活化/非活化等各種免疫應(yīng)答機制的各種抗原。河南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26