黑龍江腹水外泌體small RNA測序

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-14

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式,作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡,由大多數(shù)細(xì)胞分泌。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后,人們對外泌體的興趣增強(qiáng),并且觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。在過去幾年中,有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了各種細(xì)胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學(xué)功能。然而,我們對于EV形成的分子機(jī)制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。黑龍江腹水外泌體small RNA測序

Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗種瘤功效,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止,外泌體在肺病醫(yī)治方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在醫(yī)治靶點(diǎn)的探索。已有的研究表明外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域早日得到突破,造福更多的患者。浙江外泌體粒徑檢測建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。

肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激種瘤血管的形成來促進(jìn)種瘤的生長。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)種瘤血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,遷移能力。

樣本預(yù)處理與外泌體分離、保存:外泌體存在于人類或動(dòng)物的各種體液中,我們可以選擇不同的樣本來源進(jìn)行相關(guān)的外泌體研究。由于外泌體是來源于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷的含有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的多泡小體,分布于胞外基質(zhì)。為了獲得高純度的外泌體,必須確保有效去除所有的細(xì)胞碎片及其他不需要的雜質(zhì)。不同的實(shí)驗(yàn)樣本采集時(shí)需要注意的地方不一樣,如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清培養(yǎng)、血漿樣本采集時(shí)用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集時(shí)需要加抑菌劑等。外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。

結(jié)果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明,這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價(jià),有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測和提取還遇到一個(gè)困難即:對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體,給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年,隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦,提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn),計(jì)劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針。細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式。黑龍江外泌體miRNA芯片

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡。黑龍江腹水外泌體small RNA測序

外泌體是由各種細(xì)胞分泌的小型膜囊泡(直徑30~100nm),存在于大多數(shù)體液(如血液、尿液、髓液等)和細(xì)胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質(zhì)雙層膜包被的膜囊泡,產(chǎn)生于稱為多囊泡體的細(xì)胞外囊泡中,多囊泡體通過與細(xì)胞膜融合將外泌體釋放到細(xì)胞外。外泌體含核內(nèi)體來源的蛋白質(zhì)(如ESCRTs)、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸相關(guān)蛋白(如RabGTPase等)及細(xì)胞膜來源蛋白(如CD63, CD81等)等各種內(nèi)分泌細(xì)胞來源的蛋白和RNA,同時(shí)還含有分泌細(xì)胞膜來源和內(nèi)體膜來源的脂質(zhì)(如膽固醇和鞘磷脂等)。黑龍江腹水外泌體small RNA測序