腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追隨分子（NTA）和marker WB鑒定。所有的細胞都能分泌外泌體，但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。安徽植物外泌體western blot
幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式細胞術(shù)。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及種瘤醫(yī)治領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。福建體液外泌體粒徑檢測外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測出，特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體。
在過去十年中，細胞外囊泡已經(jīng)成為細胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細胞之間的生物信號傳遞，以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。此外，細胞外囊泡的病理生理作用開始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到認識，突出了醫(yī)治干預(yù)的潛在新靶點。此外，未修飾和工程化的細胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用。該綜述回顧近在理解細胞外膜泡生物學(xué)和細胞外囊泡在疾病中的作用方面的進展，討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機會并考慮相關(guān)的挑戰(zhàn)。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標記物，并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。建議在表征外泌體和外囊泡時，應(yīng)當同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體，探測膜內(nèi)蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)只測量含有靶標抗原的特定細胞外泌體群體。只需35 μL的稀釋樣品，即可直接獲得外泌體的表型、粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔心污染物對測試的影響。外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠?qū)?50 nm的外泌體進行全方面的表征，無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進行純化，避免因純化帶來的樣本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群，在CD171過表達系統(tǒng)中，100 nm以上的外泌體只表達了CD171。通過抗體捕獲的模式，全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠量化含有不同標記物的外泌體亞群，并對不同種群的外泌體進行特異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化，并且線性范圍可跨越3個數(shù)量級?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值。上海腹水外泌體small RNA測序
外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。安徽植物外泌體western blot
外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年， Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌 的 exosome可以被人的肥大細胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進入靶細胞后可以靶向調(diào)節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增，截止目前已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。安徽植物外泌體western blot