在20世紀80年代,外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細胞分泌的內體來源的囊泡。人們對這些細胞外囊泡的興趣逐漸增加,因為它們似乎參與了很多細胞過程。外泌體攜帶蛋白質、脂質和RNAs,介導體內不同細胞類型之間的細胞間通訊,從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近,科學家才認識到將外泌體與其他類型的細胞外囊泡分開的困難,這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復雜但正在發(fā)展的科學領域,該綜述著重于外泌體和其他分泌的細胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生,分泌及其后續(xù)的命運,因為它們的功能依賴于這些重要過程。外泌體作為腦內種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標記物。腹水外泌體染色PKH67/PKH26
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標記物,并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。建議在表征外泌體和外囊泡時,應當同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體,探測膜內蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)只測量含有靶標抗原的特定細胞外泌體群體。只需35 μL的稀釋樣品,即可直接獲得外泌體的表型、粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔心污染物對測試的影響。黑龍江血漿外泌體提取應用Tim4的外泌體強結合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。
除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63, CD81 和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(DH, 烯醇化酶 1, 醛縮酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白, P4HB, LDH, 親環(huán)素 A,FASN, MDH1 和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子, ARF1, CDC42, 人類紅細胞膜整合蛋白, SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。
外泌體早見于1981年,EG Trams 等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結構的小囊泡,并命名為 exosome。對于外泌體的作用,當時推測為細胞排泄廢物的一種方式。1996年G Raposo 等發(fā)現(xiàn)類似于B 淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigen presenting vesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+ 細胞的抗種瘤反應。2007 年H Valadi 等進一步發(fā)現(xiàn)細胞之間可以通過外泌體中RNA 交換遺傳物質。隨著有關外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、種瘤生長于侵襲等各種生物過程中。幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重復性好。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取常用的方法 。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊, 由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種 方法得到的是微泡不是外泌體 。二是過濾離心, 這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性 ,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法, 用此種方法分離到 的外泌體純度 高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理。河南體液外泌體粒徑檢測
因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。腹水外泌體染色PKH67/PKH26
在過去十年中,細胞外囊泡已經(jīng)成為細胞間通訊的重要介質,參與原核生物和高等真核生物細胞之間的生物信號傳遞,以調節(jié)不同范圍的生物過程。此外,細胞外囊泡的病理生理作用開始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內的疾病中得到認識,突出了醫(yī)治干預的潛在新靶點。此外,未修飾和工程化的細胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應用。該綜述回顧近在理解細胞外膜泡生物學和細胞外囊泡在疾病中的作用方面的進展,討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機會并考慮相關的挑戰(zhàn)。腹水外泌體染色PKH67/PKH26