外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——免疫親和層析法。利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產(chǎn)量低。分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時,ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。裝載miＲ-17-92團簇的間充質(zhì)干細胞外泌體處理中風大鼠，其神經(jīng)學功能得到改善。江西組織外泌體載藥大概費用
外泌體的脂質(zhì)雙分子膜可以保護其在血液循環(huán)中不被降解,但是這種膜結(jié)構(gòu)以及其內(nèi)含各種豐富的物質(zhì),使得外泌體載藥變得困難。外泌體只有保證膜結(jié)構(gòu)的完整性,才能不引起免疫反應(yīng),不被MPS吞噬。目前,將藥物載入外泌體的方法主要有兩種:(1)前轉(zhuǎn)載,在分離外泌體之前,將藥物與母代細胞共培養(yǎng)和對母代細胞進行轉(zhuǎn)染,可以讓母代細胞分泌含有藥物的外泌體; 主要是用轉(zhuǎn)染劑將“貨物”轉(zhuǎn)染進入親代細胞(或者將“貨物與親代細胞孵育”),然后收集培養(yǎng)基,獲得載有“貨物”的外泌體的過程。該方法的主要問題是合適有效的轉(zhuǎn)染試劑很少,且轉(zhuǎn)染試劑無法完全去除,導致轉(zhuǎn)染效率低,無法排除轉(zhuǎn)染試劑對實驗的影響。(2)后轉(zhuǎn)載,分離出外泌體之后,將藥物載入外泌體。吉林外泌體載藥研究進展許多抗ai藥物、基因藥物及抗yan藥物均可載入外泌體中。
乳腺ai是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性中流，是女性致死率較高的ai種之一。紫杉醇(PTX)是一種高效、廣譜的抗ai藥物，其不jin能殺死中流細胞，還可以調(diào)節(jié)免疫功能。使用天然殺傷細胞來源外泌體(NK－Exos)運載紫杉醇形成載藥外泌體(PTX－NK－Exos)作用于乳腺ai細胞的抗中流效果。PTX在包埋過程中會部分嵌入到外泌體的脂質(zhì)雙層中，導致載藥后外泌體的粒徑增加。抗中流實驗表明，與游離PTX相比，相同劑量的PTX－NK－Exos載藥系統(tǒng)對人乳腺aiMCF－7細胞有較高的抑制率。外泌體可增強PTX的細胞內(nèi)化，提高zhiliao效果。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——尺寸排阻色譜法。尺寸排阻色譜法時外泌體提取的一種方法，利用分子篩理論,開始是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結(jié)果顯示, 尺寸排阻色譜法得到的外泌體的蛋白豐度高于超高速離心法。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,和超高速離心相比,超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體。但是,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。間充質(zhì)干細胞外泌體可遞送突變型HIF-1α更好地恢復類固醇誘導的早期股骨頭缺血性壞死。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——超高速離心法。其中超高速離心法是常用的,該方法是被譽為分離外泌體的“金標準”。因操作簡單,不需要復雜的技術(shù)支持,并且成本相對較低而被廣fan使用。但是該方法耗時、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。所以得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都不高。外泌體對基因類藥物的裝載方式一般采用電穿孔法和化學轉(zhuǎn)染法。福建動物組織樣本外泌體載藥大概費用
電穿孔是常見的外泌體載藥手段,其原理是通過瞬時電流在外泌體膜上產(chǎn)生孔洞以允許藥物滲入其中。江西組織外泌體載藥大概費用
外泌體載藥系統(tǒng)的優(yōu)勢：1首先，外泌體天然的生物學起源為細胞內(nèi)源性zhiliao因子的產(chǎn)生和裝載提供了特有的機會。此時，zhiliao藥物、寡核苷酸和納米粒子等可被送入細胞，隨后重新包裝成分泌的囊泡。利用細胞產(chǎn)生、裝載和分泌釋放載藥外泌體使zhiliao藥物裝載過程得到簡化，為特定位點（如內(nèi)腔和囊泡膜）的藥物裝載提供了基礎(chǔ)，并且還使不易裝載的物質(zhì)句有更高的吸收效率和傳遞效率。2其次，外泌體可穿透某些生物屏障如血腦屏障，到達zhiliao靶點進行給藥。3體內(nèi)某些外泌體句有很強的穩(wěn)定性，可避免被巨噬細胞吞噬和溶酶體所降解，為體內(nèi)外泌體載藥系統(tǒng)的長時間循環(huán)和長時間暴露于炎癥等刺激環(huán)境時提供保護。江西組織外泌體載藥大概費用
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