外泌體直接載yao方式包括皂苷處理法、孵育法、凍融循環(huán)法、超聲法和擠出法等。皂苷處理法指共培養(yǎng)外泌體、藥物和皂苷溶液，然后通過(guò)透析膜、色譜柱純化得到載藥外泌體的方法。孵育法指藥物和外泌體在適宜的條件下共培養(yǎng)。凍融循環(huán)法是經(jīng)過(guò)冷凍、融化過(guò)程使外泌體包裹藥物。超聲法利用超聲波使藥物進(jìn)入外泌體中，擠出法利用擠出機(jī)實(shí)現(xiàn)外泌體載帶藥物。其中皂苷輔助藥物裝載方法是直接載yao方式中常用的一種載yao方式。上述方法也存在一些缺點(diǎn)：孵育法操作簡(jiǎn)單，但載藥量低；凍融循環(huán)法、超聲法和擠出法對(duì)儀器的要求高，且可能會(huì)破壞外泌體的質(zhì)膜結(jié)構(gòu)造成藥物泄露，終造成載藥量不理想。研究表明外泌體具有攜帶藥物透過(guò)BBB靶向膠質(zhì)瘤并抑制中流生長(zhǎng)的能力。浙江動(dòng)物組織樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)咨詢問(wèn)價(jià)
外泌體載藥系統(tǒng)的性質(zhì)評(píng)估：1對(duì)外泌體進(jìn)行一般性質(zhì)評(píng)估的方法已有多種，包括納米顆粒跟蹤分析技術(shù)(NTA)、動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、流式細(xì)胞術(shù)、原子力顯微技術(shù)(AFM)、透射電子顯微鏡(TEM)、掃描電子顯微鏡(SEM)等。2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將載藥外泌體添加到相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，通過(guò)培養(yǎng)觀察、檢測(cè)表達(dá)物或統(tǒng)計(jì)細(xì)胞凋亡率來(lái)驗(yàn)證載藥外泌體與靶細(xì)胞的親和力、藥理作用并分析其作用機(jī)制。3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：不jin可驗(yàn)證載藥外泌體的體內(nèi)藥理作用，還可研究其全部或部分藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)比較，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考慮內(nèi)環(huán)境、體溫、免疫qing除等各種因素對(duì)載藥外泌體的影響，同時(shí)還考慮個(gè)體差異的影響，從而得出更句臨床意義的結(jié)論。北京細(xì)胞外泌體載藥負(fù)載姜黃素的外泌體可經(jīng)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)血腦屏障, 運(yùn)送到腦組織中, 減輕氧化應(yīng)激，維持腦血管屏障功能。
研究證明了外泌體運(yùn)載siＲNA進(jìn)行ＲNAizhiliao的潛力。在他們的研究中，首先通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染法將ＲAD51siＲNA裝載入源于HeLa細(xì)胞和腹水的外泌體，隨后在體外成功地將siＲNA運(yùn)輸至目標(biāo)細(xì)胞。結(jié)果顯示，這種外泌體負(fù)載ＲAD51siＲNA的抑制效果與直接化學(xué)轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)，但由于化學(xué)轉(zhuǎn)染外泌體后不能將外泌體和轉(zhuǎn)染劑很好的分離，在應(yīng)用外泌體時(shí)，無(wú)法說(shuō)明是外泌體還是轉(zhuǎn)染劑在發(fā)揮作用。于是研究者又利用電穿孔使ＲAD51siＲNA載入到外泌體中。結(jié)果顯示，相比于外泌體與siＲNA的混合物(未經(jīng)載藥處理)，經(jīng)電穿孔載siＲNA后的外泌體可以有效抑制ＲAD51。并且由于ＲAD51的抑制會(huì)帶來(lái)人ai細(xì)胞的大量死亡，因而通過(guò)外泌體運(yùn)載siＲNA的方法在ai癥zhiliao方面有著誘人的前景。
電穿孔法時(shí)外泌體載藥的方法的一種，因參數(shù)容易控制,多種藥物載入外泌體都可以使用該方法。Wang等人研究了胞外囊泡作為小RNA的靶向遞送系統(tǒng),利用電穿孔法將siRNA/microRNA載入核酸適配體AS1411(AS1411是一種靶向中流細(xì)胞高表達(dá)核仁素的核酸適配體)修飾的囊泡中,然后通過(guò)外泌體將siRNA/microRNA靶向遞送到乳腺ai組織。由于AS1411和核仁素的的結(jié)合達(dá)到瘤靶向(核仁素在乳腺ai細(xì)胞表面高表達(dá)),這種靶向let-7miRNA的囊泡可在體外傳遞到人乳腺aiMDA-MB-231細(xì)胞。靜脈注射載有Cy5熒光標(biāo)記的miRNAlet-7的AS1411囊泡,可以選擇性靶向荷瘤小鼠中的中流部位,并抑制中流的生長(zhǎng),而且修飾的囊泡耐受性良好,沒有顯示明顯的非特異性副作用或免疫應(yīng)答反應(yīng)。將藥物載入外泌體的方法主要有兩種：前轉(zhuǎn)載和后轉(zhuǎn)載。
有研究發(fā)現(xiàn)，在外泌體載藥系統(tǒng)中，對(duì)外泌體的產(chǎn)生環(huán)境進(jìn)行干擾(如，缺氧)能夠改變外泌體的分泌組分。Zhu等人研究了缺氧處理的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）來(lái)源外泌體(ExoH)在心肌修復(fù)方面是否優(yōu)于其在常氧條件下產(chǎn)生的外泌體(ExoN)。在小鼠心肌梗死實(shí)驗(yàn)中，ExoH處理的小鼠具有更高的生存率、更小的疤和更好的心臟功能恢復(fù)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，相比于ExoN，ExoH具有更高表達(dá)水平的miＲ-210以及對(duì)外泌體分泌至關(guān)重要的中性鞘磷脂酶2(nSMase2)的表達(dá)。類似地，Zhu等人發(fā)現(xiàn)缺氧條件下MSC-Exo遞送的miＲ125b-5p能夠通過(guò)改善心肌細(xì)胞凋亡來(lái)促進(jìn)缺血性心臟修復(fù)。此外，他們還將ExoH與缺血心肌靶向肽綴合，構(gòu)建了一種新型的藥物遞送載體，增強(qiáng)了缺血性疾病的藥物遞送特異性。間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體既有作為載藥載體的特性，還有MSC的多種生物學(xué)功能，本身也可以作為“藥物”使用。樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)咨詢問(wèn)價(jià)
外泌體可以通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞的方式將紫杉醇釋放到受體細(xì)胞中，提高藥物對(duì)供體中流細(xì)胞的毒性。浙江動(dòng)物組織樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)咨詢問(wèn)價(jià)
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子，已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來(lái)分離外泌體。目前,市場(chǎng)已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡(jiǎn)單不需要特殊的儀器,但是價(jià)格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過(guò)夜,之后再低速離心。即可進(jìn)行外泌體的提取，此方法實(shí)行起來(lái)較為簡(jiǎn)單。浙江動(dòng)物組織樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)咨詢問(wèn)價(jià)
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