外泌體是由細胞細胞質內的晚期內泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形杯狀結構,不同類型細胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細胞膜的脂質雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質等生物活性分子,并在細胞外環(huán)境穩(wěn)定存在,而且通過傳遞供體細胞信息,調節(jié)靶細胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,PLAP)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。外泌體中含有豐富的蛋白質和遺傳物質DNA以及RNA等。江西植物葉組織外泌體提取
利用抗ai癥藥物進行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,不過目前抗ai癥藥物的運載存在著種種挑戰(zhàn),主要體現(xiàn)在以下幾點:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu,體內循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)捕捉從而延長其循環(huán)時間。近期,兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經成功被載入外泌體中,并對其抗中流作用進行了研究。水果外泌體NTA外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細胞的增殖、再生和遷移等生理過程,在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用。
密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構建和沉降方式的不同, 又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法, 前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離, 介質密度均小于外泌體密度, 離心時樣品在向超速離心管底部移動時, 會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶, 密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層, 更快地到達管底, 因此控制離心的時間很重要; 等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶, 則會根據(jù)樣品液中各種溶質成分來進行組合, 離心過程中, 無論離心時間多久, 不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶, 而不會沉淀到底部。
除運輸藥物進行疾病zhiliao之外,外泌體還能進行免疫zhiliao,外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進行免疫調節(jié)時,外泌體通常運載TGF-β1、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質。在這些研究中,分泌外泌體的母代細胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細胞或者中流細胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細胞作為母代細胞,通過熱處理的方式使淋巴瘤細胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子,如主要組織相容性復合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等,與未熱處理的鼠B淋巴瘤細胞分泌的外泌體相比,熱處理后分泌的外泌體可以增強對T細胞的激huo能力,從而增強這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。外泌體的標志物抗體有CD9、CD63、CD81、HSP70、TSG101、Alix等。
外泌體基礎醫(yī)學和臨床應用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體, 并完整保存提出了更高的技術要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質組分, 并在100 000 ×g~200 000 ×g的轉速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術被認為是外泌體分離的“金標準”, 也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結合0.22 μm或0.45 μm孔徑濾膜進行超濾來提高產物純度減少外泌體的聚集, 其分離效率容易受到加速度、轉子類型、旋轉半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。外泌體是細胞分泌囊泡的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。海洋生物組織外泌體蛋白標志物檢測
干細胞外泌體可以有效活化提高細胞能量加速細胞排毒、淡化色斑。江西植物葉組織外泌體提取
外泌體中存在著某些特定的蛋白質、脂質和多糖, 基于抗原–抗體特異性識別和結合作用原理, 可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原, 而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質, 其結果用吸光度值表示, 該方法可以快速分析已知表面生物標志物的表達, 也可以瞬時讀出外泌體的產量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠, 與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積, 該方法不jin具有高度特異性, 還具有比超速離心更高的外泌體產率。江西植物葉組織外泌體提取
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