血漿外泌體提取

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-09-08

外泌體研究可以指導(dǎo)診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導(dǎo)肝損傷(DILI)大鼠模型中,尿外泌體中的蛋白含量減少,包括CD26、CD81和其他潛在的標(biāo)志物蛋白。而另一項(xiàng)研究則發(fā)現(xiàn)DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白,如HSP70、HSP90等。MSCs來(lái)源的外泌體可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá),減弱CCL4誘導(dǎo)的肝損傷。而酒精刺激會(huì)促進(jìn)外泌體的分泌,miRNAs水平也會(huì)升高,并促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌,喚醒單核細(xì)胞的分化。盡管已取得上述成果,我們對(duì)外泌體的研究尚不夠深入,外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應(yīng)用仍有待繼續(xù)探索。示蹤病毒使用CD9作為生物標(biāo)記,通過(guò)將CD9與熒光蛋白偶聯(lián),帶熒光的膜蛋白會(huì)在表達(dá)至外泌體膜上。血漿外泌體提取

在血液和大多數(shù)體液(如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等)中均可檢測(cè)到外泌體。血液外泌體的檢測(cè)通常采用EDTA抗凝血分離的血漿,miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統(tǒng)中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs,但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解,因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應(yīng)用價(jià)值。相較于血清中相關(guān)miRNA的水平,腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質(zhì)瘤診斷和預(yù)后的指標(biāo),特別對(duì)預(yù)測(cè)中流復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有價(jià)值。唾液樣本在安靜狀態(tài)下主要來(lái)源于舌下腺和頜下腺,刺激狀態(tài)下則主要來(lái)源于腮腺。湖北體液外泌體small RNA測(cè)序外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200 nm,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70—90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關(guān)。microRNA通過(guò)和靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻譯,從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá)。microRNA在物種進(jìn)化中相當(dāng)保守,在動(dòng)物、植物等中發(fā)現(xiàn)的microRNA表達(dá)均有嚴(yán)格的組織特異性和時(shí)序性。microRNA在細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程中起多種作用,包括調(diào)控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。

外泌體是新型治理劑,惡性瘤細(xì)胞往往能夠通過(guò)分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對(duì)外泌體的質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn),惡性瘤細(xì)胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR),可以抑制宿主細(xì)胞α型干擾素(IFN-α)的產(chǎn)生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下,也為晚期病癥患者的治理提供一個(gè)新的策略和理論依據(jù)。除了瘤,外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關(guān)臨床試驗(yàn)也在世界范圍內(nèi)開(kāi)展中。外泌體被工程化改造后,具有靶向特定細(xì)胞類(lèi)型或組織的功能。

由于卵巢中流細(xì)胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphati[1]dylserine,PS)可以外泌體形式分泌入血,惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對(duì)照者,因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點(diǎn)也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIII mRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年,David Lyden和William R. Jarnagin教授團(tuán)隊(duì)合作,通過(guò)探究來(lái)自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個(gè)人類(lèi)樣品中細(xì)胞外囊泡和顆粒(extracellular vesicle and particle,EVP)的蛋白質(zhì)組學(xué)特征,鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白(特異度和靈敏度分別為95%和90%),并可區(qū)分患者的中流類(lèi)型,使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進(jìn)了一步。外泌體作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門(mén)。血漿外泌體提取

外泌體是一種由活細(xì)胞分泌的,直徑約為40~160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。血漿外泌體提取

外泌體開(kāi)始被認(rèn)為是細(xì)胞排出代謝廢物的一種方式,能夠幫助缺乏高效降解能力或位于排泄系統(tǒng)的細(xì)胞排出不必要的蛋白質(zhì)和RNA。近年來(lái),隨著人們對(duì)外泌體的深入了解,外泌體的多種生物功能先后被發(fā)現(xiàn)。如今外泌體作為一種細(xì)胞間交流、傳遞大量的生物功能分子的重要方式日益受到重視。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過(guò)以下4種途徑實(shí)現(xiàn):(1)外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別,從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;(3)外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合,將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去,此類(lèi)膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性,例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類(lèi);(4)目的細(xì)胞通過(guò)胞吞的形式攝入外泌體。血漿外泌體提取

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