自噬雙標(biāo)系統(tǒng)的工作原理為：未發(fā)生自噬的細(xì)胞及含有自噬體的細(xì)胞中，由于mCherry與GFP共同表達，細(xì)胞呈現(xiàn)黃色熒光。當(dāng)自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體后，酸性的溶酶體環(huán)境使酸敏感的GFP熒光淬滅，而mCherry不受影響，進而使自噬溶酶體呈現(xiàn)紅色熒光。因此，紅色熒光可指示自噬溶酶體形成的順利程度。紅色熒光越多，綠色熒光越少，則從自噬體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬體和溶酶體融合被阻止，自噬溶酶體進程受阻。融合、降解與回收：完全形成的自噬體與溶酶體在細(xì)胞內(nèi)相融合。自噬Atg5
自噬是參與線粒體循環(huán)更新的重要途徑, 這個過程異常也是PD發(fā)病的重要機制。當(dāng)線粒體損傷時, PINK-1和Parkin被募集至線粒體膜誘導(dǎo)線粒體自噬 (mitophagy) 活化, 從而清chu損傷的線粒體。家族遺傳型PD患者中, PINK-1和Parkin突變導(dǎo)致線粒體自噬受阻, 受損線粒體和ROS大量堆積對神經(jīng)元造成損傷。其他PD相關(guān)蛋白也參與了自噬調(diào)節(jié), DJ-1功能缺陷影響自噬流; UCH-L1與LAMP-2A結(jié)合調(diào)節(jié)分子伴侶介導(dǎo)的自噬, 影響泛素化的“貨物”進入溶酶體, 導(dǎo)致α-synuclein形成聚集體; LRRK2的突變影響分子伴侶介導(dǎo)的自噬轉(zhuǎn)運復(fù)合體組裝, 也導(dǎo)致分子伴侶介導(dǎo)自噬的缺陷。杭州細(xì)胞自噬Atg5自噬功能不全的細(xì)胞易于壞死，但是壞死組織產(chǎn)生的細(xì)胞因子（包括部分生長因子）反而會促進病變的生長。
氯喹及其衍生物羥基氯喹zhiliao小細(xì)胞肺ai、原位導(dǎo)管ai、原發(fā)性腎ai、乳腺ai等目前已經(jīng)進入臨床I期或II期研究階段, 但是關(guān)于抑制自噬zhiliao中流的觀點受到很多質(zhì)疑。首先, 沒有證據(jù)判斷氯喹是通過抑制溶酶體活性還是與溶酶體無關(guān)的其他作用發(fā)揮抗中流效應(yīng)的。其次, 也有觀點認(rèn)為自噬可能是化療過程中促進中流細(xì)胞死亡的機制。因為敲低自噬關(guān)鍵蛋白后阻礙了化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。此外, 眾多證據(jù)顯示, 有些活化自噬的藥物同樣具有抗中流作用。用于預(yù)防家族性乳腺ai的他莫昔芬能夠誘導(dǎo)自噬活化。
自噬方面，P53通過轉(zhuǎn)錄依賴和非依賴機制發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。P53轉(zhuǎn)錄喚醒AMPK和結(jié)節(jié)性硬化復(fù)合物1/2(tuberoussclerosiscomplex1/2,TSC1/TSC2)而阻止mTOR誘導(dǎo)自噬；核內(nèi)P53還可轉(zhuǎn)錄喚醒損傷調(diào)節(jié)自噬調(diào)節(jié)子(damageregulatedautophagymodulator,DRAM)，提高自噬；另一方面，胞質(zhì)P53與高遷移率盒蛋白1(highmobilitygroupboxchromosomalprotein1,HMGB1)形成復(fù)合物協(xié)調(diào)自噬水平，靶向敲除胞質(zhì)P53基因會提高HMGB1表達誘導(dǎo)自噬，而敲除HMGB1則提高胞質(zhì)P53表達水平阻止自噬。此外還有報道自噬蛋白ATG7能夠直接調(diào)節(jié)P53表達。自噬在心肌缺血再灌注過程不同階段發(fā)揮著不同的作用。
自噬阻止劑可以通過阻止自噬通路中的某種蛋白來實現(xiàn)阻止自噬，也可以通過直接擾亂溶酶體功能來阻止自噬，因為溶酶體是自噬完成的關(guān)鍵場所。氯喹和羥氯喹是兩種臨床中常用的藥物，較早它們被用于調(diào)整瘧疾，后來又發(fā)現(xiàn)其對SLE等病有效，它們都是通過降低溶酶體酸性、擾亂溶酶體功能來阻止自噬的。這些分子現(xiàn)在也在臨床實驗中與化療藥物聯(lián)用以降低耐藥性。解決特異性不足的一個未來的研究方向，是針對特異性更高的靶點（即該蛋白只存在于自噬通路中）開發(fā)阻止劑/激動劑。另外，針對系統(tǒng)性的脫靶效應(yīng)，可以通過靶向遞送的方式將脫靶效應(yīng)降至較低，例如將自噬阻止劑與化療藥物連接在同一個靶向到病變的藥物載體上，使其只影響病變中的自噬水平而不干擾免疫系統(tǒng)。在自噬過程中，通過壓力誘導(dǎo)自噬后，細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)被自噬體的雙膜結(jié)構(gòu)隔離。研究主要集中在酵母及其它重要的單細(xì)胞真核生物,而對植物和哺乳動物細(xì)胞中的自體吞噬過程的了解則更少。自噬Atg5
姜黃素可誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞自噬保護內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。自噬Atg5
電鏡作為自噬檢測的金指標(biāo)。由于自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，普通光鏡下觀察不到自噬體的形成，因此，直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為：新月狀或杯狀，雙層或多層膜，有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體（AV1）的特征為：雙層或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含胞漿成分，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等。自噬溶酶體（AV2）的特征為：單層膜，胞漿成分已降解。WB檢測標(biāo)志物L(fēng)C3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1；
組織蛋白酶Cathepsin活力檢測；
IF檢測自噬潮autophagic flux。 自噬Atg5
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