在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。外泌體分離商業(yè)試劑盒主要用于尿液、血清、腦脊液和細(xì)胞培養(yǎng)基等無細(xì)胞樣本。天津外泌體NTA
微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測(cè)平臺(tái), 這些方法包括免疫親和分離、膜過濾、納米線捕獲、聲納米過濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡(luò)組成的緊湊單元, 能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品; 且根據(jù)特定的功能, 微通道可以相互連接, 使用額外的特定裝置來微調(diào)流體運(yùn)動(dòng)。微流控技術(shù)能夠以極高的準(zhǔn)確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實(shí)驗(yàn)室過程, 取代昂貴的設(shè)備, 基于微流控技術(shù)的電化學(xué)外泌體檢測(cè)芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。北京植物莖組織外泌體wb檢測(cè)血液中的成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體,可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的移動(dòng)和增殖以及血管新生來促進(jìn)傷口愈合。
Buller等利用miR-146b的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞,使其分泌的外泌體負(fù)載miR-146b,并將外泌體注射至移植到小鼠體內(nèi)的GBM處。結(jié)果表明,這種利用外泌體運(yùn)輸miRNA進(jìn)行zhiliao的方法可以有效抑制中流的生長(zhǎng)。對(duì)于GBM類腦部中流,體內(nèi)zhiliao不同于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),更需考慮腦部組織微環(huán)境對(duì)藥物的影響,外泌體可運(yùn)輸miRNA并不破壞其在腦部中流組織處的原本功效。然而,至今還沒有利用外泌體載藥經(jīng)靜脈注射zhiliaoGBM的報(bào)道,這主要是由于跨越血腦屏障(BBB)仍然是外泌體進(jìn)行腦部中流zhiliao需要解決的難題。盡管如此, Wood等報(bào)道的在進(jìn)行阿茲茨海默病zhiliao時(shí)利用對(duì)腦部神經(jīng)元特異性肽RVG靶向的外泌體穿過BBB的研究顯示了經(jīng)靶向修飾的外泌體具備穿過BBB的潛力,因此外泌體載藥zhiliao具有廣闊的前景。
外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖, 基于抗原–抗體特異性識(shí)別和結(jié)合作用原理, 可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原, 而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì), 其結(jié)果用吸光度值表示, 該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá), 也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠, 與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級(jí)磁珠可賦予更大的接觸面積, 該方法不jin具有高度特異性, 還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。妊娠期間,胎盤可釋放外泌體到母體循環(huán),在正常妊娠或胎盤相關(guān)妊娠并發(fā)癥中發(fā)揮重要作用。遼寧水果外泌體粒徑檢測(cè)
外泌體給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙。天津外泌體NTA
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200 nm,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。 近年來的研究表明lncRNA能在標(biāo)貫遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá),參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄jihuo、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運(yùn)輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程,與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系。 lncRNA芯片對(duì)lncRNA進(jìn)行功能研究也被更多的關(guān)注,通過設(shè)計(jì)不同的lncRNA探針,可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學(xué)過程中差異表達(dá)的lncRNA和mRNA信息,找到lncRNA的靶基因位點(diǎn)深入分析調(diào)控機(jī)制。天津外泌體NTA
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