NIX招募Atg8蛋白家族啟動線粒體自噬:NIX/Bnip3可以通過其N端的WXXL序列與Atg8蛋白家族成員相結(jié)合誘導(dǎo)線粒體自噬。與Parkin類似，NIX/Bnip3也存在正反饋調(diào)節(jié)。NIX氨基結(jié)構(gòu)域上的Leu17與Bnip3蛋白的Ser17和Ser24磷酸化，可以促進NIX/Bnip3與LC3的相互作用，但磷酸化的具體機制目前尚未闡明。NIX/Bnip3競爭性結(jié)合Bcl-2介導(dǎo)線粒體自噬:NIX/Bnip3含有BH3結(jié)構(gòu)域，可與Bcl-2/Bcl-xL結(jié)合。當(dāng)細胞缺氧時，NIX/Bnip3大量表達，可以與Beclin競爭性結(jié)合Bcl-2/Bcl-xL，從而導(dǎo)致Beclin游離。游離的Beclin與多種蛋白質(zhì)形成Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶復(fù)合體，該復(fù)合體蛋白可以激huoAtg5，從而激huo線粒體自噬。這是NIX引起線粒體自噬的另外兩個假說。在一些病變發(fā)生的早期，促進自噬可能是一條可行的抗病變途徑。廣州自噬RFP-GFP-LC3B
自噬發(fā)生過程：在此過程中，自噬體的形成是關(guān)鍵，其直徑一般為300~900nm，平均500nm，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等。與其他細胞器相比，自噬體的半衰期比較短，只有8min左右，說明自噬是細胞對于環(huán)境變化的有效反應(yīng)。在整個自體吞噬過程中,細胞質(zhì)和細胞器都受到破壞,較明顯的是線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受損。雖然自體吞噬并不直接破壞細胞膜和細胞核,但是有證據(jù)表明,在較初斷裂或消化后,細胞膜和細胞核會然后變成溶酶體以消化和分解自身。江西自噬推動關(guān)系中自噬并不直接參與誘導(dǎo)細胞死亡，而是作為能量供應(yīng)者保障凋亡順利進行。
自噬能清理不正常構(gòu)型的蛋白質(zhì)，并消化受損和多余的細胞器，是真核細胞中普遍存在的降解/再循環(huán)系統(tǒng)。細胞自噬通路子實體首先會在細胞中形成杯狀膜結(jié)構(gòu)，隨后就會吞噬指定的細胞物質(zhì)并進行降解，這些膜的形成能被蛋白質(zhì)復(fù)合體機器所催化，研究者SaschaMartens解釋道，如今我們發(fā)現(xiàn)了參與自噬體形成的多種因子，但截止到目前為止我們并不清楚這些因子是如何聚集在一起啟動這些膜的形成的。其中一個因素就是Atg9蛋白，其重要性顯而易見，但研究者并不清楚其所扮演的關(guān)鍵角色，Atg9存在于胞外小囊泡中，研究者指出，其能形成一種平臺，以便自噬及其能夠組裝形成自噬體，Atg9囊泡在細胞中非常豐富，這就意味著當(dāng)自噬體被需要時其就能比較快被招募過來。
到目前為止伴隨使用自噬晚期抑制劑，通過檢測LC3B-I/II 轉(zhuǎn)化是自噬流檢測的金指標(biāo)。當(dāng)使用自噬晚期抑制劑巴弗洛霉素 A1 (bafilomycin A1, Baf A1)刺激細胞時，細胞內(nèi)自噬溶酶體降解被抑制，此時觀察到的 LC3B-II 的變化jindaibiao自噬小體數(shù)量的改變。當(dāng)細胞自噬流活化后，LC3B-II 的含量會在使用 Baf A1的基礎(chǔ)上進一步增加，而當(dāng)細胞自噬流阻斷后, LC3B-II 的含量則不會在使用 Baf A1 的基礎(chǔ)上發(fā)生改變。除 Baf A1 外，其他一些能提高溶酶體 pH 值的自噬晚期抑制劑也可以用于自噬流的檢測。若待檢測藥物+Baf A1 組 LC3B-II 與jin Baf A1 處理組相比明顯增加則daibiao所檢測藥物可以增加自噬小體或自噬溶酶體的合成。相反，若處理組與對照組相比，LC3B-II 降低則daibiao處理藥物減少自噬小體的合成。自噬還參與五沒食子酰葡萄糖抗皰疹病毒I型病毒作用，機制可能與抑制mTOR通路相關(guān)。
在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3等融合蛋白來示蹤自噬形成（常用）：GFP-LC3單熒光指示體系。由于電鏡耗時長，不利于監(jiān)測（Monitoring）自噬形成。我們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了GFP-LC3指示技術(shù)：無自噬時，GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點，一個斑點相當(dāng)于一個自噬體，可以通過計數(shù)來評價自噬活性的高低。研載生物已開發(fā)出高效的評價用GFP-LC3病毒載體，通過瞬時高效傳染細胞，配合活細胞工作站成功評價自噬流。自噬信號通路受到嚴(yán)密調(diào)控，在基礎(chǔ)水平上起到重要管家作用，可使細胞在多種應(yīng)力條件下繼續(xù)存活。湖北自噬流的檢測
大自噬是較為主要的自噬通路，負責(zé)將細胞質(zhì)內(nèi)物質(zhì)通過中間雙重細胞膜囊泡傳輸至溶酶體。廣州自噬RFP-GFP-LC3B
自噬與凋亡合作方式在現(xiàn)有研究報道中較為多見。該種情況下，自噬與凋亡的調(diào)控目標(biāo)都是促進細胞死亡。合作方式分為3種：(1)各自同步引發(fā)細胞死亡；(2)一種為主，另一為輔；(3)一方功能缺陷情況下，另一方替補誘導(dǎo)細胞死亡。許多誘導(dǎo)凋亡的刺激常常也會誘導(dǎo)自噬，比如神經(jīng)酰胺調(diào)整乳腺病和結(jié)腸病中均發(fā)現(xiàn)凋亡與自噬同時上調(diào)。在調(diào)整T淋巴細胞的臨床試驗中也發(fā)現(xiàn)二者被同時喚醒，藥物氯碘喹啉通過擾亂mTOR信號通路誘導(dǎo)白血病細胞和骨髓瘤細胞發(fā)生自噬性死亡和凋亡；靶向敲除自噬相關(guān)蛋白ATG7或用自噬阻止劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)會阻止caspase喚醒，減少細胞凋亡；許多情況下，自噬誘導(dǎo)細胞死亡的潛力被凋亡所阻止，但它會在凋亡功能缺陷時發(fā)揮關(guān)鍵作用。依托泊苷、毒胡蘿卜內(nèi)酯等處理的凋亡缺陷Bax/Bak?/?的小鼠胚胎成纖維細胞中發(fā)現(xiàn)細胞自噬上調(diào)，特異性阻止劑阻止自噬后細胞存活率明顯上調(diào)。上述情況下，自噬和凋亡通過共同作用、互補合作，或替補機制共同引發(fā)細胞死亡。廣州自噬RFP-GFP-LC3B